中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立

田月珍; 黄锡霞; 狄江; 田可川; 吴伟伟; 徐新明; 哈尼克孜; 付雪峰; 张艳花; 马依拉; 艾买提; 《新疆农业科学 》 2012 北大核心 CSCD

摘要：【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR Green I染料技术的Real-Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其熔解曲线分析。【结果】以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值(Ct)与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系,GAPDH基因标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=一3.679 51g/X+35.648,相关系数R=0.999 8;试验重复性好,批内和批间变异系数(CV%)分别为0.22%～3.45%和1.30%～4.89%。【结论】所建立的方法具有快速、线性范围广、重复性强等特点,GAPDH可作为内参基因用于绵羊相关基因的定量表达研究。

关键词： 中国美利奴羊(新疆型) GAPDH基因 RT-PCR 内参基因