科研产出
牛冠状病毒S蛋白生物信息学分析及其受体结合域的多克隆抗体制备
《畜牧与兽医 》 2025 北大核心
摘要：旨在预测和分析牛冠状病毒(BCoV)S蛋白的结构和潜在功能,并进行克隆表达及多克隆抗体的制备,为疫苗研究和实验室诊断提供基础.利用生物信息学软件预测分析S蛋白生物学特性,克隆其受体结合域(RBD)基因并与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒后转化BL21感受态细胞并利用IPTG诱导表达,表达的蛋白经镍柱纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体并检测.结果:S蛋白由1 364个氨基酸组成,相对分子质量为150.81 kDa,等电点为5.51,不稳定指数为33.22,脂溶性指数为87.22;该蛋白1~1 307 aa为胞外区,1 308~1330aa为跨膜区,1331~1 363 aa为胞内区,1~14 aa为信号肽,310-612 aa为RBD;有36个潜在的B细胞表位,RBD中包含12个;该蛋白α-螺旋占27.95%,β-折叠占23.04%,无规则卷曲占49.01%;分析S蛋白三级结构,与二级结构预测结果基本一致;成功克隆了 S蛋白RBD,大小与预期相符,与载体pET-30a(+)连接后经双酶切、测序验证表明载体构建成功;经SDS-PAGE与Western blot验证蛋白成功表达后,将纯化后的蛋白免疫小鼠并分离血清,效价可达1∶128 000;经间接免疫荧光试验与Western blot验证多克隆抗体能够识别病毒S蛋白,证明重组蛋白具有良好的免疫原性,可诱导产生病毒特异性抗体.结论:成功分析和预测了 BCoV S蛋白的结构及功能,并获得S蛋白RBD的重组蛋白及多克隆抗体,为后续的研究奠定了基础.
关键词： 牛冠状病毒 S蛋白 受体结合域 生物特性 多克隆抗体
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犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法的建立
《黑龙江畜牧兽医 》 2018 北大核心
摘要：为了建立犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法,试验利用抗细粒棘球绦虫EdiagA864兔多克隆抗体进行HRP标记制备酶标抗体,以抗细粒棘球绦虫EdiagA864单克隆抗体2D12作为包被抗体,建立犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法,对特异性、敏感性、重复性等进行研究,并用优化的Dot-ELISA检测方法对69份犬粪便样品进行检测。结果表明:所建立的Dot-ELISA检测方法敏感性为1∶8,与犬蛔虫阳性粪便、犬贾第虫阳性粪便均无交叉反应,使用不同批次的膜片均能得到相同结果;应用所建立的Dot-ELISA检测方法对69份犬粪便样品进行检测,其中9份人工感染参照样品的检出率为100%(9/9),60份长春地区临床样品检测结果为阴性。说明试验建立的犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于犬细粒棘球绦虫感染的临床检测。
关键词： 细粒棘球绦虫 EdiagA864 多克隆抗体 单克隆抗体 Dot-ELISA 检测
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犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用
《中国生物制品学杂志 》 2017 CSCD
摘要：目的建立简便、特异的检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法以细粒棘球绦虫EdiagA864蛋白为抗原,免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体;利用HRP标记兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体,通过溶解、超声方法处理犬粪便样品;以抗细粒棘球绦虫单克隆抗体2D12作为捕获抗体,HRP标记的兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体为检测抗体,通过棋盘法确定抗体最佳包被浓度、最佳封闭剂、待检粪样最佳稀释比例及酶标抗体最佳浓度。应用建立的双抗体夹心ELISA法对来自长春地区的64份犬粪便样品及来自新疆的8份犬粪便阳性样品进行检测。结果兔抗EdiagA864多克隆抗体的效价为105。建立的双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:抗体包被浓度为1∶50,封闭剂为1%BSA,粪液稀释度为1∶5,酶标二抗稀释度为1∶800。建立的双抗体夹心ELISA法与犬贾第虫和犬蛔虫阳性样品均无交叉反应;检测不同稀释度的粪便液,当稀释至1∶20时,P/N仍大于2;检测6份阳性样品与4份阴性样品的批间和批内变异系数均小于8。用建立的方法检测8份阳性样品的结果均为阳性,64份待检样品的结果均为阴性。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性较强,敏感性较高,重复性较好,为细粒棘球绦虫流行病学调查及诊断提供了一种更简便、快速、特异的免疫学检测方法。
关键词： 细粒棘球绦虫 双抗体夹心ELISA EdiagA864 多克隆抗体
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