科研产出
PEDV贴壁种毒优化及其在悬浮细胞中的适应性培养
《黑龙江畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：为了给猪流行性腹泻病毒（PEDV）XJ-DB2株在悬浮驯化阶段提供稳定的贴壁种毒,验证优化后贴壁种毒在ST悬浮细胞上的感染增殖效果,试验选取3种不同来源的贴壁型Vero细胞,进行连续染毒传代后筛选出传代稳定、病毒效价高的种毒,并测定在ST悬浮细胞上进行驯化传3代后的病毒效价。结果表明:PEDV XJ-DB2株在Zj-Vero细胞上连续驯化21代,病毒效价为1×107.5 TCID50/mL,驯化后的毒株在ST悬浮细胞上连续3代悬浮驯化后,病毒效价为3.16×106 TCID50/mL。说明最适应PEDV XJ-DB2株增殖的贴壁细胞为Zj-Vero细胞,经Zj-Vero细胞驯化后的毒株可以在ST悬浮细胞上增殖培养。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 悬浮培养 Vero细胞 收获时间 病毒效价
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悬浮MDCK细胞的驯化与H5亚型禽流感病毒的培养
《中国农业科学 》 2018
摘要：【目的】为评估细胞源重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的有效性提供数据支持。【方法】选取一株来源清楚的贴壁MDCK细胞,通过逐步降低培养基中血清含量及不断调整无血清培养基配方,将其驯化为悬浮MDCK细胞,并以此为基质增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株和H5N1 Re-8株;比较不同毒株在贴壁和悬浮MDCK细胞中增殖的差异。分别将经悬浮MDCK细胞增殖的病毒与经SPF鸡胚增殖的病毒制备成重组禽流感病毒(H5亚型)三价灭活疫苗,免疫商品蛋鸡和商品鸭,通过血清学方法比较细胞源与鸡胚源禽流感灭活疫苗的免疫效果。海兰褐商品蛋鸡:6 050只,分为3组,2组为免疫组,每组3 000只,28日龄免疫0.5 mL/只,80日龄免疫0.5 mL/只;不免疫对照组1组,50只,同等条件下隔离饲养。分别于蛋鸡日龄49、110、210 d(即首免后21 d、82 d、6个月)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。长白飞鸭:220只,分为3组,2组为免疫组,每组100只,10日龄免疫0.5 mL/只,24日龄免疫1.0 mL/只,不免疫对照组20只,同等条件下隔离饲养。分别于鸭日龄24、38、52 d(即首免后14、28、42 d)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。【结果】获得一株可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞,摇瓶、5L生物反应器中的培养数据及细胞状态显示,该细胞株适合放大生产。此悬浮MDCK细胞培养48 h细胞密度可由1.5×10~6 cells/mL左右增殖到1.0×10~7 cells/mL左右,状态良好、活率高、单个悬浮于培养基中。以此悬浮MDCK细胞为基质增殖重组禽流感病毒,H5N1 Re-6株的HA效价达1﹕512,TCID_(50) 10~(7.67)/mL,EID_(50) 10~(7.83)/0.1 mL;H5N1 Re-7株的HA效价达1﹕256,TCID_(50)达10~(7.33)/mL,EID_(50)10~(7.17)/0.1 mL;H5N1 Re-8株的HA效价达1﹕1024,TCID_(50) 10~(8.5)/mL,EID_(50) 10~(8.38)/0.1 mL,与经贴壁MDCK细胞增殖的病毒毒价相当。细胞源三价灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡,首免后21 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕446、1﹕111、1﹕416,二免后30 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕588、1﹕362、1﹕776,6个月时分别为1﹕239、1﹕128、1﹕223,维持了较高的抗体水平;免疫长白飞鸭,首免后14 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕30、1﹕17、1﹕64,28 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕194、1﹕91、1﹕137,42 d时分别为1﹕416、1﹕128、1﹕239;以上两组的试验结果与鸡胚源重组禽流感灭活疫苗免疫后诱导产生的HI抗体效价相当。【结论】经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞株,其增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株、H5N1 Re-8株能力强,且病毒被制备成灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡和长白飞鸭可产生较高水平的抗体。为大规模工业化生产禽流感疫苗提供技术支持。
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BHK-21细胞的悬浮驯化及其在悬培条件下对口蹄疫A型病毒的培养
《广东畜牧兽医科技 》 2008
摘要：选取BHK-21细胞株进行悬浮驯化培养,通过对悬浮培养的培养液、PH、溶氧、罐压、搅拌等各种工艺条件的试验,摸索出稳定的培养条件,实现了连续传代49代。并通过接种口蹄疫A型鼠化弱病毒,比较了单层贴壁细胞和悬浮49代细胞接种病毒后的毒价。结果显示两种培养条件下,BHK-21细胞对口蹄疫A型病毒的培养没有明显差异。
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牛型布氏菌单克隆抗独特型抗体苗生产工艺的研究
《中国生物制品学杂志 》 1997
摘要：采用生物反应器悬浮培养生产牛布氏杆菌单克隆抗独特型杂交瘤细胞，定期收获细胞，技106细胞／鼠行腹腔接种已用石蜡油预处理的BALB／c小鼠，从而大量生产腹水阻断效价达1：40000的牛布氏杆菌单克隆抗独特型抗体。佐以20％的铝胶生理盐水，配成新一代牛布氏杆菌二抗苗，经大动物（牛）攻毒试验，保护力可达6个月以上，其它各项检定指标均达到规程要求，并建立了切实可行的生产工艺。
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