哈萨克羊胎儿期臀脂前体脂肪细胞的增殖和分化特性研究

张倩雯; 李婧平; 岳成广; 王嘉俊; 李忠慧; 李文蓉; 《中国畜牧兽医 》 2025 北大核心

摘要：[目的]分离哈萨克羊臀脂形成关键窗口期的前体脂肪细胞,从组织学和细胞学角度掌握哈萨克羊臀脂沉积的发育性特征,为深入研究绵羊臀脂沉积的分子机制奠定基础.[方法]采集哈萨克羊妊娠第50(E50)、60(E60)、70(E70)、80(E80)、94(E94)和105(E105)天的胎儿,观察其臀脂形态变化,并对E70、E80及E94时期胎儿的臀脂组织进行油红O染色及成脂分化相关基因的表达检测,确定哈萨克羊臀脂沉积的关键时期.利用Ⅰ型胶原酶分段消化法分离E70、E80和E94时期哈萨克羊臀脂前体脂肪细胞,连续培养6 d以绘制细胞生长曲线,比较3个胎儿期来源的前体脂肪细胞增殖能力.对E70、E80和E94时期哈萨克羊臀脂前体脂肪细胞进行成脂诱导分化,通过油红O染色、脂滴含量测定及成脂分化相关基因表达水平的实时荧光定量PCR检测,比较不同胎儿期获得的前体脂肪细胞的成脂分化特性.[结果]哈萨克羊E70时期出现明显的脂臀形态,E80时期臀部组织开始出现明显的脂滴,并在E94时期脂滴积累增多.成脂分化相关基因表达量随妊娠时间逐渐增加,且在E80~E94时期呈倍数增加.通过Ⅰ型胶原酶分段消化法分离获得E70、E80和E94时期的哈萨克羊臀脂前体脂肪细胞,细胞形态均呈成纤维细胞样,生长活力良好;3个时期的前体脂肪细胞经诱导分化处理后均有成熟脂滴生成,且成脂分化相关基因CEBPα、PPARγ、LPL和FABP4表达量较诱导分化前均显著增加(P<0.05).E80时期前体脂肪细胞在诱导分化第3天即形成脂滴,相较于E70和E94时期脂滴形成时间最短、含量最高.[结论]本研究分离获得的哈萨克羊E70、E80和E94时期胎儿臀脂前体脂肪细胞增殖活力良好,可诱导分化形成成熟脂滴,且E80时期臀脂前体脂肪细胞分化能力更强.

关键词： 哈萨克羊 胎儿期 臀脂 前体脂肪细胞 原代分离培养 成脂分化相关基因