抗寄生虫中药活性成分体外抗细粒棘球蚴作用

李昆雷; 夏俊; 邱美龄; 胡美荷; 吉古孝安; 候梦丹; 翟少华; 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：目的 评价抗寄生虫中药水提物和有机溶剂粗提物体外对细粒棘球蚴的作用效果。方法 从感染绵羊肝脏细粒棘球蚴包囊中分离原头节，体外培养24 h后，取活性大于95%的原头节（100μl，约100个）加入96孔板，分别加入终浓度为0.8 mg/ml （低浓度组）、1.6 mg/ml （中浓度组）、3.2 mg/ml （高浓度组）的鸦胆子、苦楝皮、辣蓼、石榴皮、使君子、槟榔、贯众、鱼藤、马蔺子、五倍子和仙鹤草等11种抗寄生虫中药的水提物，体外作用72 h后，伊红染色法检测原头节活性，倒置显微镜观察下观察原头节的形态，计算死亡率；同时设相同浓度的阿苯达唑组和空白对照组。从具有体外抗原头节作用的中药中提取黄酮、多糖、皂苷和生物碱等粗提物，分别以终浓度1.00 mg/ml体外作用于原头节72 h后，观察原头节形态，计算死亡率；同时设空白对照组。对体外抗原头节效果明显的粗提物进行液相色谱与串联质谱联用分析。组间比较采用单因素ANOVA分析，两两比较采用LSD-t检验。结果 中药水提物作用72 h后，鸦胆子、苦楝皮、辣蓼水提物高浓度组原头节边缘模糊，结构松散，基质溶解；其余8种中药水提物高浓度组原头节形态正常，各部分结构清晰；阿苯达唑组原头节生发层有轻微损伤；空白对照组原头节形态正常。体外培养72 h后，鸦胆子、苦楝皮和辣蓼水提物高浓度组原头节的死亡率分别为（99.63±0.57）%、（90.89±1.10）%和（51.93±0.60）%，中浓度组分别为（85.97±1.50）%、（81.14±1.19）%、（42.46±0.56）%，低浓度组分别为（78.34±1.35）%、（77.27±0.92）%、（36.66±0.60）%，与空白对照组[（0.62±0.51）%]相比差异均有统计学意义（F=180 678.22、41 488.99、44 346.38,19 543.86、27 887.32、34 590.79,20 059.467、41 953.68、17 993.77，均P ＜0.01），与阿苯达唑组[（30.03±2.02）%]比较差异均有统计学意义（F=6 585.72、4 210.84、646.46,2 956.80、2 849.68、210.83,2 365.92、2 712.28、58.12，均P ＜0.01）；其余8种中药水提物高、中、低浓度组原头节的死亡率与对照组比较差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）。鸦胆子黄酮、苦楝皮黄酮、鸦胆子皂苷、辣蓼皂苷和辣蓼生物碱组原头节皱缩、结构松散、基质溶解，原头节死亡率分别为（98.33±2.89）%、（96.67±5.77）%、100%、（99.33±1.15）%和（56.67±2.11）%，与空白对照组[（10.33±2.51）%]比较差异均有统计学意义（F=1 584.00、563.71、3 808.47、3 099.52、14.65，均P ＜0.01）；其余中药粗提物组原头节的死亡率与对照组比较差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）。液相色谱与串联质谱联用分析结果显示，正、负离子模式下分别鉴定出741、398种代谢产物，其中正离子模式下从鸦胆子黄酮粗提物中鉴定出差异显著的黄酮类化合物4种，分别为漆黄素、5-甲基-7-甲氧基异黄酮、儿茶素和甜橙黄酮；负离子模式下鉴定出8种，分别为原花青素B2、槲皮素-3β-D-葡萄糖苷、枸桔苷、橙皮素、槲皮素、木犀草素、芹菜素和黄豆黄素。结论 鸦胆子、苦楝皮和辣蓼水提物，鸦胆子黄酮、苦楝皮黄酮、鸦胆子皂苷和辣蓼皂苷有明显体外抗细粒棘球蚴的作用，且效果优于阿苯达唑。

关键词： 细粒棘球蚴 抗寄生虫中药 水提物 粗提物 液相色谱与串联质谱联用分析