科研产出
牛源无乳链球菌对喹诺酮耐药的基因特征
《福建农林大学学报(自然科学版) 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：采用微量肉汤稀释法测定左氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星3种喹诺酮类药物对110株奶牛隐性乳腺炎无乳链球菌（分离自中国10省区21个规模化奶牛养殖场）的最小抑菌浓度（MIC）,通过PCR检测gyrA、gyrB、parC和parE基因的喹诺酮耐药决定区（QRDR）,并分析其突变位点.结果表明：110株牛源无乳链球菌对左氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为85.5%、98.2%、94.5%;左氧氟沙星耐药菌株对其他2种喹诺酮类药物耐药，且均发生了QRDR基因突变，氨基酸突变位点有GyrA的Ser81Leu、Glu85Lys, ParC的Ser79Phe、Asp83Tyr, ParE的Asp437Asn,其中，耐药菌基因最主要的突变类型是GyrA（Ser81Leu）+ParE（Asp437Asn）,该突变类型对喹诺酮类药物呈中高度耐药；ParC的Ser79Phe或Asp83Tyr突变类型对喹诺酮类药物的敏感性下降，ParC的Ser79Phe突变与GyrA的Ser81Leu或Glu85Lys突变联合时，对喹诺酮类药物高度耐药.本研究结果对兽医临床上喹诺酮类药物的耐药控制及合理使用提供了一些依据.
关键词： 无乳链球菌 喹诺酮耐药决定区 喹诺酮类药物 奶牛乳腺炎
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无乳链球菌Sip基因的克隆与原核表达
《草食家畜 》 2016
摘要：无乳链球菌表面免疫相关蛋白(Surface immunogenic proteins,Sip)具有高度保守性,是无乳链球菌疫苗研究的重要靶标。通过PCR技术扩增Sip基因,将其插入pET-22b载体构建重组质粒pET-22b-Sip,并对重组质粒进行双酶切、PCR鉴定及测序;转入BL21(DE3)中诱导表达,检测重组蛋白的大小及反应原性。结果表明,所扩增Sip基因大小为1 300bp,与GeneBank参考序列同源性为99.16%;蛋白分析表明,目的蛋白大小为50KDa,具有良好的反应原性,为无乳链球菌的免疫预防提供依据和基础。
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改良格拉纳达培养基分离奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌的效果评价
《新疆农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探索一种适合奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌高效分离、鉴定的培养基,对格拉纳达培养基(Granada medium)进行改良,用其分离奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌,并进行效果评价。【方法】改良格拉纳达培养基(Modified Granada medium,MGM)的成分为示蛋白胨、玉米淀粉、葡萄糖、丙酮酸钠、盐酸半胱氨酸、硫酸镁、对氧氮己环丙磺酸(MOPS)、磷酸氢二钠、甲氨蝶呤钠、结晶紫和琼脂粉。用MGM、改良爱德华培养基(Modified Edwards Medium,MEM)和血琼脂(Blood Agar,BA)三种培养基对187份奶牛隐性乳房炎奶样进行无乳链球菌分菌培养,采用PCR方法鉴定分离菌株,从而评价三种培养基在分离奶样中无乳链球菌的特异性和敏感性。【结果】在乳房炎无乳链球菌分离中,MGM、MEM和BA的特异性分别为100%、75.0%和18.2%,敏感性分别为88.0%、53.2%和29.1%。MGM作为选择、鉴定培养基,利用无乳链球菌产生红-橙色色素的特性,通过肉眼观察菌落颜色,一步程序就可以鉴定出无乳链球菌。【结论】该方法为奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌的分离提供了一种快捷、简便的新方法。
关键词： 改良格拉纳达培养基 奶牛乳房炎 无乳链球菌 B群链球菌 分离鉴定
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奶牛乳房炎无乳链球菌的分离鉴定与特异、快速检测方法
《新疆农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】了解新疆奶牛乳房炎病例中无乳链球菌的感染状况和生物学特性,建立特异、快速检测方法。【方法】采集新疆4个不同地区规模化奶牛场乳房炎奶样,分别用鉴别培养基和绵羊血琼脂平板进行无乳链球菌分离培养、形态学观察、生化试验、PCR鉴定、致病性和常用抗生素敏感性试验。【结果】从检测出的139份乳房炎阳性奶样中分离出无乳链球菌24株。所分离菌株培养特性与生化反应符合该菌特性;依据元乳链球菌16S rRNA基因序列设计引物扩增所得PCR产物在405 bp处出现特异性条带;分离菌株对青霉素、氯霉素、庆大霉素、红霉素、万古霉素、克林霉素、头孢西丁、环丙沙星均敏感,对四环素、强力霉素、复方新诺明耐药。【结论】Granada选择性培养基培养和PCR扩增均可用于乳房炎奶样中无乳链球菌的特异、快速鉴定;新疆乳房炎奶样中无乳链球菌感染率为17.27%。
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