犬细粒棘球绦虫抗原ELISA检测方法的建立

班万里; 徐晶; 刘帅; 卡马力·吾力江; 潘星羽; 王冰洁; 王延; 塔力甫汗·古丽扎提; 特列吾汗·穆尼拉; 赵莉; 张壮志; 《畜牧与兽医 》 2024 北大核心

摘要：旨在建立敏感特异的犬细粒棘球绦虫(Eg)抗原ELISA检测方法。用细粒棘球绦虫表膜抗原(EgSfAg)免疫兔获得抗血清，同时利用抗EgSfAg杂交瘤细胞株4E8制备单抗，通过亲和层析获得纯化的多抗和单抗4E8,制备Eg、多房棘球绦虫、泡状带绦虫、多头绦虫和犬弓首蛔虫等5种蠕虫抗原作为特异性质控样品，利用单抗4E8进行Western blot检测，通过人工感染犬结合氢溴酸槟榔碱下泄法制备阳性对照样品，同时设置敏感性质控样品和阴性对照样品，构建样品盘，以多抗为捕捉抗体，HRP标记的单抗4E8为检测抗体，建立犬Eg抗原ELISA检测方法，并验证该方法的敏感性和特异性。结果：Western blot检测证明单抗4E8仅与EgSfAg有特异性反应；建立的ELISA检测方法最低检出量为1∶512;对130份阳性样品的平均检出率为95.38%;交叉试验结果显示仅EgSfAg结果为阳性；检测150份阴性样品的平均符合率为95.56%。综上，建立的ELISA方法具有较好敏感性和特异性，为终末宿主棘球蚴病的诊断和流行病学调查提供了一种安全、简便、高效的免疫学检测方法。

关键词： 细粒棘球绦虫 抗原 单克隆抗体 ELISA 样品盘