科研产出
小反刍兽疫核酸疫苗的制备及免疫效果评估
《黑龙江畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：为了制备针对小反刍兽疫病毒（Peste des peties ruminants virus, PPRV）F基因的核酸疫苗,并评价其对小鼠的免疫效果,试验采用DNA重组技术将F基因、优化密码子后的F基因以及连接乙型脑炎病毒信号肽（JEVSP）的优化密码子后的F基因3个目的片段分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1（+）,构建重组质粒pcDNA3.1（+）-F、pcDNA3.1（+）-F-opt和pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt,大量培养重组质粒菌后,以碱裂解法将菌体悬浮裂解,经中空纤维切向流超滤和微滤浓缩处理,将制备的核酸疫苗以100μg/只的剂量给Balb/c小鼠肌肉注射免疫,共分为4组,pcDNA3.1（+）-F组、pcDNA3.1（+）-F-opt组、pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt组和pcDNA3.1（+）空载体组,每隔14 d免疫1次,共免疫3次,每次免疫14 d后利用中和试验检测抗体水平。结果表明:成功制备核酸疫苗pcDNA3.1（+）-F、pcDNA3.1（+）-F-opt和pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt,免疫Balb/c小鼠14 d后pcDNA3.1（+）空载体免疫组中和抗体阳性率为0,pcDNA3.1（+）-F组、pcDNA3.1（+）-F-opt组、pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt组抗体转阳性,且pcDNA3.1（+）-F-opt组、pcDNA3.1（+）-JEVSP-F-opt组抗体水平呈逐渐增加的趋势。说明成功制备小反刍兽疫核酸疫苗,并且能在小鼠上产生抗体。
关键词： 小反刍兽疫 F基因 核酸疫苗 制备工艺 浓缩 免疫水平
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Ag85B核酸疫苗的免疫原性和保护性研究
《中国人兽共患病杂志 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：扩增结核分枝杆菌的Ag85B基因并克隆于真核表达载体 pJW4 30 4 ,转染COS - 7细胞后 ,Westernblot检测表明该基因在细胞内得到了正确表达。用该质粒免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,免疫三次后 ,用纯化的重组蛋白Ag85B检测小鼠血清中的抗体 ,抗体滴度达到 1:10 2 4 0 0 ,(γ -干扰素测定表明 ,免疫动物的干扰素含量达到 116 0 3± 10 4 pg /ml。实验结果说明Ag85B核酸疫苗在实验动物体内引起了较强的免疫应答。三次免疫后经静脉强毒攻击 ,免疫组小鼠肺脏和脾脏的细菌数比对照空载体组分别减少了 1 5和 15倍以上。本研究表明 ,该核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞和体液免疫应答并获得较高的保护效率。
关键词： 结核分枝杆菌病 Ag85B分泌蛋白抗原 核酸疫苗 免疫原性 保护效率
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MPT63核酸疫苗的制备及其免疫原性
《中国生物化学与分子生物学报 》 2003 北大核心 CSCD
摘要：扩增结核分枝杆菌分泌蛋白MPT63编码序列 ,克隆于真核表达载体pJW 4 30 3中 .转染COS 7细胞 ,用Western印迹检测表明该基因在细胞内得到正确表达 .用该质粒连续免疫C5 7BL 6小鼠 3次后 ,用纯化的重组蛋白MPT63检测小鼠血清中的抗体 ,发现抗体滴度达到 10 5,免疫动物中γ干扰素的含量达到 2 5 8± 0 2U ml ,为空载体DNA免疫对照组的 2 0倍以上 ,说明MPT63核酸疫苗在实验动物体内引起了较强的免疫应答
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