科研产出
高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒体外抗体依赖增强作用的初步研究
《黑龙江畜牧兽医 》 2019 北大核心
摘要：为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)体外抗体依赖增强作用,试验对HP-PRRSV TJ-92株毒液(1×10~(6.0)TCID_(50)/0.1 mL)进行10倍倍比稀释,与等体积2倍倍比稀释的各稀释度HP-PRRSV TJ-92株特异性阳性血清(中和效价为1∶2~5)中和后,在Marc-145细胞上培养增殖72 h,测定收获毒液的病毒含量。结果表明:能使1×10~(0 )TCID_(50)～1×10~(6.0) TCID_(50 )HP-PRRSV毒液病毒含量增高最大的阳性血清稀释度依次为1∶2~9、1∶2~(10)、1∶2~9、1∶2~8、1∶2~9、1∶2~7、1∶2~8,经计算,HP-PRRSV毒液病毒含量最高可提升1×10~(4.5)TCID_(50)/0.1 mL。说明HP-PRRSV在体外表现出抗体依赖增强作用,且被中和HP-PRRSV含量越低时增强作用越明显。
关键词： 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 抗体依赖增强作用 病毒含量 血清中和试验 TCID_(50)
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重组禽流感病毒H7N9 H7-Re1株培养条件的优化
《中国农业科学 》 2018
摘要：【背景】高致病性禽流感疫情的暴发造成了巨大的经济损失和环境卫生的破坏,现阶段疫苗接种仍是我国控制禽流感的主要措施之一,需要大量安全、高效和低成本的禽流感病毒疫苗。鸡胚法制备禽流感病毒疫苗的工艺存在原料来源受限、过程复杂、个体差异、培养周期长和不易放大培养等缺陷。而利用生物反应器大规模培养动物细胞生产病毒疫苗,不仅可以大幅度提高单位产量,实现高密度细胞和高病毒产率,同时可保证产品质量。目前我国用于禽流感防控的疫苗为重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)。国内细胞全悬浮工艺生产禽流感灭活疫苗单罐产能最大为6 000 L,高病毒含量抗原的提供是生产高效疫苗的主要影响因素之一。【目的】为了能够提供稳定的、高效的生产抗原,开展种毒驯化试验。【方法】将重组禽流感病毒H7N9 H7-Re1株分别在MDCK细胞及悬浮MDCK细胞上增殖。在MDCK细胞上通过不同的病毒接种剂量、不同收获时间、不同TPCK-胰酶浓度的试验,确定了H7N9 H7-Re1株在MDCK细胞上最佳收获时间为64 h,最佳接毒剂量为0.008%或MOI为10~(-4),最佳TPCK-胰酶浓度为2μg·mL~(-1),根据确定的最佳培养条件连续传代,并对各代次病毒含量进行检测。【结果】在MDCK细胞上传至第5代时,HA可达1﹕256,每1 mL病毒含量达到10~(8.5)TCID50,每0.1 mL病毒含量达到10~(8.5)EID50,均高于其他代次。【结论】将第5代确定为MDCK细胞传代最佳代次,可考虑确定为生产用基础种毒代次。在悬浮MDCK细胞上对重组禽流感病毒传代进行了优化试验,确定了H7N9 H7-Re1株在悬浮MDCK细胞上最佳收获时间为48 h,最佳接毒剂量MOI为10~(-2),最佳TPCK-胰酶浓度为4—8μg·mL~(-1)。在实际疫苗生产过程中,可选择MDCK细胞或悬浮MDCK细胞来扩繁种毒。
关键词： 重组禽流感病毒 MDCK细胞 悬浮MDCK细胞 病毒含量
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