绵羊Follistatin基因表达及其结构域的功能分析

张宁; 张雪梅; 刘明军; 谭立新; 《生物工程学报 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：为研究羊Follistatin基因的功能,提取了绵羊卵巢总RNA,通过RT-PCR方法获得羊FollistatincDNA的完整开放阅读框(1038bp)。去除信号肽序列后与原核表达载体pET41a连接,构建重组表达质粒pFSsig-,经大肠杆菌诱导表达获得FSsig-蛋白(66kDa)。通过RT-PCR克隆了包含N端和结构域1的Follistatin突变体(FSN+D1),将FSN+D1片段插入慢病毒载体(pLEX-MCS)构建了pFS-N+D1慢病毒重组表达质粒。在293T细胞中进行慢病毒的包装,再感染绵羊肌肉原代细胞,得到稳定表达FSN+D1的肌肉细胞系,通过细胞生长曲线结果显示稳定表达FSN+D1的肌肉细胞明显比正常肌肉细胞增殖快,且差异极显著(P<0.01),表明绵羊FSN+D1结构域有促进肌肉细胞生长的功能。

关键词： 绵羊Follistatin基因 原核表达 慢病毒 细胞生长曲线