肺炎克雷伯菌与链球菌双重PCR检测方法的构建

王一霖; 王燕; 梁纤纤; 郭明强; 樊晓慧; 夏俊; 苏战强; 《草食家畜 》 2024

摘要：【目的】旨在建立一种可同时检测肺炎克雷伯菌和链球菌的双重PCR检测方法。【方法】选取肺炎克雷伯菌KP-Khe基因和链球菌EF-Tu基因保守片段，分别合成2对特异性引物，优化双重PCR反应体系，摸索其特异性、最佳退火温度、引物浓度和细菌核酸浓度，并通过该方法对临床样品进行检测验证。【结果】该双重PCR检测方法可有效扩增出肺炎克雷伯菌和链球菌的489 bp和197 bp的特异性片段，最适退火温度为58℃、最适引物浓度为12 ng/μL、最适模板浓度为3 ng/μL。将该方法应用于临床对15份样品进行检测，其中2份样品检测出肺炎克雷伯菌呈阳性，1份样品检测出链球菌呈阳性，与分离鉴定结果一致。【结论】该研究建立的双重PCR技术，可为临床诊断肺炎克雷伯菌、链球菌及混合感染提供了一种便捷高效的检测方法，具有一定的应用价值。

关键词： 肺炎克雷伯菌 链球菌 双重PCR