科研产出
山羊环鸟苷酸-腺苷酸合成酶的原核表达及其酶活性分析
《中国兽医科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为了研究山羊环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（gcGAS）的生物学功能，通过构建含gcGAS基因的pET28a-gcGAS原核表达载体，在Rosetta (DE3)表达菌中进行表达，经纯化获得了纯度较高的重组gcGAS蛋白，并测定其酶促活性。结果显示，在优化表达条件下，实现了重组gcGAS蛋白的可溶性表达，其能以ATP和GTP为底物合成了第二信使分子2′3′-c GAMP。结论：原核表达的可溶性重组gcGAS蛋白具有生物酶催化活性，这为后续gcGAS介导的抗病毒天然免疫机制研究及其应用开发奠定了一定的基础。
关键词： 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶 环鸟苷酸-腺苷酸 原核表达 蛋白纯化 酶活性
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泰勒虫重组抗原Tams1-spag基因原核表达与纯化
《动物医学进展 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为了在低成本的情况下,得到高浓度、高纯度的环形泰勒虫表面重组抗原的融合蛋白,设定表达过程中不同的OD600nm、IPTG浓度与诱导时间,探索最佳表达条件。通过KCl染色法切胶后分别经透析袋电洗脱法与快速离心法回收目的蛋白。对上述试验的蛋白样品进行SDS-PAGE和Western blot检测。结果表明,在OD600nm=1时加入浓度为1mmol/L IPTG,过夜诱导时,重组蛋白的表达量最大。在KCl染色法切胶回收目的条带的基础上,电洗脱法与快速离心法均能得到同等浓度的高纯度目的蛋白,经Western blot检测重组蛋白的生物活性没有改变,仍具有良好的反应原性。
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