科研产出
绵羊miR-432对MFSD12基因表达的调控
《中国畜牧杂志 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：试验旨在探讨miR-432 与MFSD12基因的靶向关系.利用miRanda、targetscan在线预测miR-432 的靶基因,并对靶基因 3'-UTR区可能与miR-432 结合的位点进行分析.利用Xho I、Not I将绵羊MFSD12基因的野生型及突变型序列插入psiCHECK-2 载体,构建psiCHECK-2-MFSD12-W-3'-UTR和psiCHECK-2-MFSD12-W-3'-UTR载体并与miR-432 mimics及其阴性对照共转染 293T细胞,利用双荧光素酶试剂盒测定荧光素酶活性.同时利用荧光定量PCR和Western Blot检测过表达/抑制miR-432 后MFSD12在mRNA和蛋白表达水平的变化.结果显示,与阴性对照组相比,psiCHECK-2-MFSD12-W-3'-UTR+miR-432 mimics荧光素酶活性极显著降低.转染miR-432 mimics显著下调MFSD12基因mRNA和蛋白的表达,而转染miR-432 inhibitor组与阴性对照组相比,MFSD12基因mRNA和蛋白的表达差异不显著.本研究成功构建了MFSD12野生型及突变型载体,证实绵羊miR-432 可靶向调控MFSD12基因的表达.
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猪miR-199a-3p对mTOR基因表达的调控
《动物医学进展 》 2019 北大核心
摘要：通过生物信息学预测miR-199a-3p与mTOR-3′UTR的结合位点,人工合成猪mTOR-3′UTR及突变型片段克隆至双荧光素酶载体上,构建野生型(psiCHECK-2-W-mTOR-3′-UTR)和突变型(psiCHECK-2-M-mTOR-3′-UTR)双荧光素酶报告质粒。给PK-15细胞分别转染miR-199a-3p mimics、negative control和mTOR-3′-UTR野生型/突变型双荧光素酶报告载体,用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,分别采用RT-qPCR和Western blot检测mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平。结果表明,将含mTOR-3′-UTR的野生型和突变型双荧光素酶报告质粒与miR-199a-3p mimic共转染PK-15细胞,野生型报告质粒表达的荧光素酶活性显著低于其阴性对照组(P<0.05);转染miR-199a-3p mimics能显著下调mTOR基因mRNA和蛋白的表达(P<0.05),而转染miR-199a-3p Inhibitor组和Inhibitor-NC组相比,mTOR基因蛋白表达差异不显著(P>0.05)。成功构建了猪野生型及突变型mTOR-3′-UTR双荧光素酶报告质粒,通过双荧光素酶试验、RT-qPCR及Western blot证实miR-199a-3p与猪mTOR-3′-UTR存在靶向调控关系。
关键词： miR-199a-3p mTOR基因 表达调控
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