科研产出
犬细粒棘球绦虫抗原ELISA检测方法的建立
《畜牧与兽医 》 2024 北大核心
摘要：旨在建立敏感特异的犬细粒棘球绦虫(Eg)抗原ELISA检测方法。用细粒棘球绦虫表膜抗原(EgSfAg)免疫兔获得抗血清，同时利用抗EgSfAg杂交瘤细胞株4E8制备单抗，通过亲和层析获得纯化的多抗和单抗4E8,制备Eg、多房棘球绦虫、泡状带绦虫、多头绦虫和犬弓首蛔虫等5种蠕虫抗原作为特异性质控样品，利用单抗4E8进行Western blot检测，通过人工感染犬结合氢溴酸槟榔碱下泄法制备阳性对照样品，同时设置敏感性质控样品和阴性对照样品，构建样品盘，以多抗为捕捉抗体，HRP标记的单抗4E8为检测抗体，建立犬Eg抗原ELISA检测方法，并验证该方法的敏感性和特异性。结果：Western blot检测证明单抗4E8仅与EgSfAg有特异性反应；建立的ELISA检测方法最低检出量为1∶512;对130份阳性样品的平均检出率为95.38%;交叉试验结果显示仅EgSfAg结果为阳性；检测150份阴性样品的平均符合率为95.56%。综上，建立的ELISA方法具有较好敏感性和特异性，为终末宿主棘球蚴病的诊断和流行病学调查提供了一种安全、简便、高效的免疫学检测方法。
关键词： 细粒棘球绦虫 抗原 单克隆抗体 ELISA 样品盘
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新疆某地区犬流感病毒血清学及病原学调查
《塔里木大学学报 》 2021
摘要：为了解新疆某地区流浪犬和宠物犬群体中犬流感现状,应用ELISA方法和RT-PCR方法,分别对2019年1月至9月期间收集的流浪犬和宠物犬共计250份血清样本和179份鼻拭子样本进行血清学和病原学检测。检测结果显示:血清学检测流浪犬和宠物犬流感抗体阳性率分别是58%（58/100）和5.33%（8/150）;病原学检测流浪犬和宠物犬流感病毒抗原阳性率分别是4%（4/100）和1.27%（1/79）,RT-PCR产物测序序列经BLASTn比对与犬流感H3N2亚型同源性最高。血清学结果显示调查地区一定比例的流浪犬和宠物犬曾感染犬流感;病原学结果显示调查地区流行H3N2亚型犬流感。犬流感病毒血清学及病原学调查可为公共卫生安全评估提供参考。
关键词： 犬流感病毒 血清学 病原学 ELISA RT-PCR
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阻断ELISA与病毒中和试验检测PPR抗体的比较分析
《中国预防兽医学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为选择一种简便、快速、敏感性高、特异性好的小反刍兽疫(PPR)血清学检测方法,本实验收集了506份山羊和绵羊血清样品,采用ELISA和病毒中和试验(VNT)两种方法对PPR病毒(PPRV)抗体进行检测。结果显示ELISA和VNT检出的阳性率分别为44.9%和48.6%。两种方法的符合率Kappa值为0.925,表明这两种方法具有较高的一致性,但ELISA更简便、快速、敏感,更便于基层单位使用。本研究为PPR血清流行病学调查及疫苗免疫效果评价方法的选择提供相关的技术参数。
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细粒棘球绦虫感染终末宿主检测方法的评价
《畜牧与兽医 》 2015 北大核心
摘要：对细粒棘球绦虫感染家/牧犬常用的检测方法开展比对试验,并予以评估。对人工感染细粒棘球绦虫试验犬含卵粪样在不同时段用饱和蔗糖液(1.28 g/m L)漂浮虫卵,镜检;经化学药物驱虫,收集人工感染试验犬驱虫前、后粪样,流行病学调查中收集的家/牧犬粪样,用粪抗原抗体夹心ELISA检测试剂盒检测,同时,对检出的家/牧犬阳性粪样,再用虫卵漂浮法复检;通过氢溴酸槟榔碱下泻法检查家/牧犬感染细粒棘球绦虫虫体,同时,对下泻犬粪样用粪抗原检测和虫卵漂浮法进行复检。饱和蔗糖液漂浮虫卵最佳时段为2 h,可检出虫卵量与其他时段差异显著(P<0.05);人工感染犬驱虫前、后粪样经粪抗原检测,OD值差异极显著(P<0.01);对12 288份家/牧犬粪样进行粪抗原检测,阳性样品991份,感染率为8.1%(991/12 288),对991份阳性粪样进行虫卵漂浮法复检,检查出54份粪样中含虫卵。经下泻法检查312只家牧犬,其中,262只犬下泻,检查出27只犬感染细粒棘球绦虫成虫;对262份下泻犬粪样进行粪抗原检测,阳性29份;对262份下泻犬粪样用虫卵漂浮法检查,仅14份粪样检出虫卵。犬粪抗原抗体夹心ELISA检测犬感染细粒棘球绦虫可及时区分驱虫前、后感染状况,其更为安全、快捷、准确。
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泰勒焦虫重组蛋白TaSP-Tams1-SPAG1间接ELISA检测方法的建立
《新疆农业大学学报 》 2013 北大核心
摘要：以真核表达的焦虫表面抗原重组蛋白TaSP-Tams1-SPAG1作为ELISA板包被抗原,通过方阵实验确定抗原包被浓度,探索抗原包被时间、温度、一抗及二抗血清稀释度及作用时间,建立牛环形泰勒焦虫表面抗原重组蛋白ELISA方法。结果得出TaSP-Tams1-SPAG1的最佳包被浓度为10μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,ELISA阳性反应的临界值为OD492nm≥0.348,重复试验变异系数小于12%,所建立的ELISA方法不与牛巴贝斯虫及牛瑟氏泰勒虫血清发生反应。TaSP-Tams1-SPAG1为抗原建立的ELISA方法特异性强,敏感度高,重复性好,为牛环形泰勒焦虫病的准确检测及防治提供技术支持。
关键词： 泰勒焦虫 TaSP-Tams1-SPAG1 重组蛋白 ELISA
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EgM123免疫犬血清抗体监测
《草食家畜 》 2011
摘要：【目的】探索EgM家族重组蛋白(EgM 123)与弗氏佐剂结合免疫犬后血清抗体变化规律。【方法】利用间接ELISA法检测免疫组与对照组血清特异性抗体(IgG)的变化规律,并以Western-blotting方法进行验证。【结果】ELISA实验结果经统计学方法分析显示,不中和免疫组与对照组血清抗体时,特异性抗体IgG差异不显著(P>0.05),但中和血清抗体时,差异显著(P<0.05)。【结论】中和血清抗体,能够更明显的看到EgM家族重组蛋白(EgM 123)引起的犬特异性免疫应答。
关键词： 重组蛋白EgM123 特异性抗体 犬 ELISA Western-blotting
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布鲁氏菌病VirB8-PCR诊断试剂盒的特异性评价
《中国动物检疫 》 2009
摘要：使用VirB8-PCR诊断试剂盒对布鲁氏菌标准株、疫苗株及新疆分离株共7株布鲁氏菌的VirB8基因序列扩增、克隆并与Genbank中发表的VirB8基因序列(AF226278)进行比较和分析,发现:该基因非常保守,7株布鲁氏菌的同源性在99.2%以上,其中A菌与Rev1基因序列100%同源,B菌与Genbank发表的基因序列100%同源;牛种(544A、A19)和羊种(M5、Rev1)分别各自在相同部位发生了相同的碱基突变,因此VirB8基因有可能做为布鲁氏菌疫苗菌的鉴定分类基因。VirB8基因在布鲁氏菌中高度保守,可作为布鲁氏菌检测模板,VirB8-PCR诊断试剂盒特异、敏感,检测结果可靠。
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多头绦虫膜蛋白(45M)对羊脑多头蚴病的免疫保护效果
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：目的观察多头绦虫膜蛋白(45M)对羊脑多头蚴病的免疫保护效果。方法12只新疆哈萨克羊随机均分为免疫组和对照组,免疫组用重组多头绦虫膜蛋白(45M)与佐剂乳化后颈部皮下2点免疫,抗原免疫剂量为50μg/只,注射体积为1ml,共免疫4次,每次间隔3周。对照组以谷胱甘肽硫转移酶(GST)表达物代替免疫抗原同法免疫。定时采集羊血,分离血清。ELISA法检测血清中IgG和IgM的抗体水平。于末次免疫后105d,免疫组和对照组每羊经口攻击感染5000个多头绦虫虫卵,感染2周后剖检羊脑多头蚴囊数,计算减囊率。将经孵化激活的六钩蚴分别置于含10%两组免疫攻击感染羊血清的RPMI1640培养液中培养,观察两组羊血清对多头绦虫六钩蚴的杀伤情况。结果免疫组有3只羊感染多头蚴包囊,平均囊荷数为1.5个,囊平均直径为2.2mm,免疫组减囊率为68.9%。六钩蚴与免疫组羊血清共培养72h后,90%死亡,被杀伤的六钩蚴出现萎缩,或膨胀致使内部结构模糊。ELISA检测结果显示,在第4次免疫后(第9周),免疫组IgG抗体水平达到最高(2.32±0.76),与对照组(0.70±0.42)间的差异有统计学意义(t=4.47,P<0.01)。经口感染六钩蚴后(第24周),免疫组IgG和IgM抗体水平(1.53±0.81,0.90±0.26)仍显著高于对照组(0.64±0.43,0.43±0.15)(P<0.01)。结论重组蛋白45M可引起机体较强的体液免疫反应。
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用ELISA方法检测原头节及EgM免疫犬IgG变化情况
《地方病通报 》 2007
摘要：目的用不同的抗原检测免疫犬后的血清,判定所引起的IgG变化和有无与其他虫种的交叉反应。方法在用原头节可溶性粗抗原和EgM家族重组表达蛋白对犬的免疫保护实验中,以原头节可溶性粗抗原、细粒棘球绦虫成虫可溶性粗抗原和多头绦虫可溶性粗抗原包被检测时,通过间接ELISA的方法检测其中的特异性抗体IgG的变化规律及与多头绦虫抗原有无交叉反应。结果原头节可溶性粗抗原检测出相对应免疫组实验犬IgG应答变化情况,同时用细粒棘球绦虫成虫包被抗原亦检测出IgG存在一定差异,但不十分明显,与多头绦虫无交叉反应。检测EgM重组蛋白免疫组IgG时它们存在一定差异,但不十分明显。结论原头节可溶性粗抗原免疫组通过ELISA的方法较为准确地检测出其IgG的应答情况;EgM重组蛋白免疫组的抗体检测仍需进一步完善。
关键词： 原头节 可溶性粗抗原 细粒棘球绦虫 多头绦虫 ELISA IgG
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