科研产出
精子载体法转基因技术研究进展
《中国畜牧兽医 》 2010 北大核心
摘要：精子载体法是以精子作为外源基因的载体,在受精过程中将外源基因导入动物胚胎,从而使外源基因进入子代的基因组中。作者就精子结合外源基因的机制,精子与外源基因结合的方法、影响精子转染外源基因和生产转基因动物的精子因素进行简要介绍,并对发展起来的输精管内注射转染法、曲细精管微注射法和睾丸直接注射法等精子载体转基因新途径进行综述。
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精子载体介导法生产转基因绵羊的研究
《草食家畜 》 2001
摘要：采用精子载体介导法先后对 1 952只绵羊进行转基因试验 ,经PCR和South ern检测 1 592只后代中 ,转基因羊 1 0 3只 ,最高转基因效率达 9.86 % ;其中 2只转基因母羊乳汁中人胰岛素原基因表达量分别达 1 99.97mg/L和 1 83.6 2mg/L。荧光原位PCR结果证实牛、山羊和绵羊的精子经处理能携带外源基因 ,精子携带外源DNA的比率分别为 :绵羊 2 7.1 2 %、山羊 30 .57%、牛 31 .1 6 % ;同时外源基因进入到精子细胞并定位于核及其外周区域。研究还提示使用精子载体介导法时必须充分洗涤精液以除去精清 ,防止其中的DNase降解外源基因
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人胰岛素原乳腺表达基因构建及其在转基因小鼠乳汁中的表达
《草食家畜 》 2001
摘要：从绵羊和人的基因组中用PCR扩增分别克隆了羊乳球蛋白 (BLG) 5’和 3’调控区及人胰岛素原 (hINS)基因组DNA ,并以此为基础构建了人胰岛素原乳腺表达载体 ( pSh -BLG -hINS)。该表达载体包括 4.2kbBLG 5’调控区和 2 .1kbBLG 3’调控区 ,以及 1 .2kb人胰岛素原基因组DNA。将绿色荧光蛋白基因与BLG 5’和 3’调控区融合后转化乳腺细胞系 (TD47) ,通过荧光显微镜观察和紫外吸收检测 ,证明GFP在TD47乳腺细胞系中获得了表达。用BLG -hINS基因分别注射小鼠 ,通过PCR和限制性内切酶检测分析 ,共获得 5只转基因小鼠。经放免 (RIA)检测 ,两只转基因母鼠乳汁中人胰岛素原的表达量分别为 37.44和 39.99mg/L。该结果表明 ,本文所构建的 pBLG乳腺表达结构 ,能够调控外源基因在乳腺表达
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