科研产出
环形泰勒虫表面抗原重组蛋白Tasp-Tams1-Spag1生物信息学分析与原核表达
《中国动物传染病学报 》 2015
摘要：运用生物信息学软件对环形泰勒虫表面抗原串联基因Tasp-Tams1-Spag1进行分析,预测其编码蛋白的主要特性与抗原表位等,并对此串联基因进行克隆与原核表达。结果表明:串联重组蛋白Tasp-Tams1-Spag1属于不稳定非分泌型亲水性蛋白;编码346个氨基酸;有4个低复杂性的结构域,且含有Sorb与Btz、NL、NOT的同源区域;可能存在11个B细胞表位优势区段与17个T细胞表位优势区段,含有T、B细胞联合表位,表明Tasp-Tams1-Spag1重组蛋白可能具有良好的免疫原性。IPTG诱导重组蛋白原核表达,结果显示,该重组蛋白以包涵体形式存在;经Western blot检测,表明此串联蛋白反应原性良好,为后续深入研究免疫抗原奠定基础。
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泰勒虫重组抗原Tams1-spag基因原核表达与纯化
《动物医学进展 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为了在低成本的情况下,得到高浓度、高纯度的环形泰勒虫表面重组抗原的融合蛋白,设定表达过程中不同的OD600nm、IPTG浓度与诱导时间,探索最佳表达条件。通过KCl染色法切胶后分别经透析袋电洗脱法与快速离心法回收目的蛋白。对上述试验的蛋白样品进行SDS-PAGE和Western blot检测。结果表明,在OD600nm=1时加入浓度为1mmol/L IPTG,过夜诱导时,重组蛋白的表达量最大。在KCl染色法切胶回收目的条带的基础上,电洗脱法与快速离心法均能得到同等浓度的高纯度目的蛋白,经Western blot检测重组蛋白的生物活性没有改变,仍具有良好的反应原性。
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泰勒焦虫重组蛋白TaSP-Tams1-SPAG1间接ELISA检测方法的建立
《新疆农业大学学报 》 2013 北大核心
摘要：以真核表达的焦虫表面抗原重组蛋白TaSP-Tams1-SPAG1作为ELISA板包被抗原,通过方阵实验确定抗原包被浓度,探索抗原包被时间、温度、一抗及二抗血清稀释度及作用时间,建立牛环形泰勒焦虫表面抗原重组蛋白ELISA方法。结果得出TaSP-Tams1-SPAG1的最佳包被浓度为10μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,ELISA阳性反应的临界值为OD492nm≥0.348,重复试验变异系数小于12%,所建立的ELISA方法不与牛巴贝斯虫及牛瑟氏泰勒虫血清发生反应。TaSP-Tams1-SPAG1为抗原建立的ELISA方法特异性强,敏感度高,重复性好,为牛环形泰勒焦虫病的准确检测及防治提供技术支持。
关键词： 泰勒焦虫 TaSP-Tams1-SPAG1 重组蛋白 ELISA
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细粒棘球绦虫cDNA克隆EgA31在大肠埃希氏菌M15中的表达及重组蛋白的纯化和复性
《中国兽医科技 》 2002 北大核心 CSCD
摘要：为了获得细粒棘球绦虫 66ku抗原的重组蛋白和抗血清 ,用该抗原的cDNA克隆EgA3 1构建了pQE3 0EgA3 1重组质粒 ,在大肠埃希氏菌M15中表达 ,经亲和层析获得纯度较高的EgA3 1重组蛋白 ;用经复性处理的重组蛋白免疫动物 ,获得EgA3 1重组蛋白抗血清。本文就重组蛋白的稳定性和在复性处理中遇到的问题进行了讨论。
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