牛分枝杆菌ESAT-6蛋白抗体间接ELISA方法的建立

许礼义; 徐志光; 宋振忠; 徐敏; 古努尔; 李爱巧; 黄炯; 呼西旦; 《草食家畜 》 2010

摘要：利用分子克隆技术,提取结核分支杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6基因,然后对其进行克隆表达,获得高效表达的ESAT-6蛋白,Western blot证实ESAT-6蛋白可与结核牛阳性血清发生特异性反应。以纯化复性的ESAT-6重组蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA特异性为94%、敏感性为63.35%。交叉反应试验表明,该抗原只与牛副结核病阳性血清有交叉反应,而不与其他5种常见的牛病阳性血清发生交叉反应。用间接ELISA方法对285份PPD阳性牛血清、对74份PPD阴性牛血清、79份牛γ-干扰素(IFN-γ)检测阳性血清进行检测,其负荷率分别为62.1%、98.64%、83.54%。实验结果表明建立的间接ELISA方法可以用于牛结核病感染和免疫抗体检测,且具有很好的开发和应用前景。

关键词： 牛结核 ESAT-6蛋白 间接ELISA