绵羊miR-432对MFSD12基因表达的调控

廖丽; 张雪梅; 邱梅玉; 《中国畜牧杂志 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：试验旨在探讨miR-432 与MFSD12基因的靶向关系.利用miRanda、targetscan在线预测miR-432 的靶基因,并对靶基因 3'-UTR区可能与miR-432 结合的位点进行分析.利用Xho I、Not I将绵羊MFSD12基因的野生型及突变型序列插入psiCHECK-2 载体,构建psiCHECK-2-MFSD12-W-3'-UTR和psiCHECK-2-MFSD12-W-3'-UTR载体并与miR-432 mimics及其阴性对照共转染 293T细胞,利用双荧光素酶试剂盒测定荧光素酶活性.同时利用荧光定量PCR和Western Blot检测过表达/抑制miR-432 后MFSD12在mRNA和蛋白表达水平的变化.结果显示,与阴性对照组相比,psiCHECK-2-MFSD12-W-3'-UTR+miR-432 mimics荧光素酶活性极显著降低.转染miR-432 mimics显著下调MFSD12基因mRNA和蛋白的表达,而转染miR-432 inhibitor组与阴性对照组相比,MFSD12基因mRNA和蛋白的表达差异不显著.本研究成功构建了MFSD12野生型及突变型载体,证实绵羊miR-432 可靶向调控MFSD12基因的表达.

关键词： miR-432 MFSD12基因 表达调控