结核分枝杆菌ESAT-6 DNA疫苗的细胞和体液应答及保护效率研究

蔡宏; 田霞; 呼西旦; 李淑霞; 朱玉贤; 《中国预防兽医学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：构建了含分枝杆菌抗原ESAT_6( 6kDa)分泌蛋白 (结构基因 )的真核表达载体pJW43 0 3 ,进行了酶切鉴定和序列分析 ,确定含有正确的读码框。用脂质体介导法将重组表达质粒导入COS7细胞内并瞬时表达 ,收集表达细胞或浓缩上清液 ,进行SDS_PAGE电泳 ,用结核杆菌特异性抗体进行免疫印迹检测 ,证明上述重组质粒能在哺乳动物细胞中表达出特异蛋白。重组表达质粒肌注免疫小鼠 ,首免后 2 1d,未检测到特异性抗体 ,二免和三免 2 1d后ESAT_6的特异性抗体平均效价分别为 1∶40 0和 1∶80 0。三免后 2 1dESAT_6的特异性细胞因子γ_干扰素的浓度为 1 2 .8± 0 .4ng/mL,而阴性对照空载体DNA组三免后只诱导产生 <0 .1ng/mL的γ_干扰素。三免后经静脉强毒攻击 ,免疫组小鼠肺脏的细菌数比对照空载体组减少了 90 %以上。本研究表明 ,该核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞和体液免疫应答并获得较高的保护效率。

关键词： 结核分枝杆菌 ESAT-6分泌蛋白抗原 ESAT-6DNA疫苗 免疫原性 保护

利用PCR技术检测537份新疆结核病人痰标本中的结核分枝杆菌

蔡宏; 李君莲; 呼西旦; 李淑霞; 黄丽茜; 陈银华; 许苗; 朱玉贤; 《中国人兽共患病杂志 》 2001 北大核心 CSCD

摘要：目的　提高聚合酶链反应在检测人结核分枝杆菌中的特异性和敏感性。方法　在聚合酶链反应中对 4种DNA片段即结核杆菌特异插入序列IS6 110 ,IS10 81,和 16SrRNA ,6 5kDa摸板进行了比较 ;为获取较多的细菌DNA ,临床痰标本处理采用了国际标准化方法主要包括用一定量的N -乙酰 -L半胱胺酸和氢氧化钠处理痰标本 ;改进了RCR混和液的成份即添加了甘油 ,dUTP -尿嘧啶糖基化酶。结果　选择IS6 110作为结核杆菌特异性摸板用于检测细菌DNA ,制备出了 6批人结核杆菌PCR检测试剂盒 ,在对来自新疆结核病研究所的 5 37份痰标本的检测中发现 ,该试剂盒检测的特异性为 6 5 .97% ,敏感性为 93 .5 3 %。结论改良TB -PCR试剂盒显示有较高的敏感性 ,特异性还有待于进一步完善 ,该试剂盒在临床诊断中有一定的价值。

关键词： 结核分枝杆菌 痰标本 聚合酶链式反应 结核杆菌PCR检测试剂盒

结核分枝杆菌和其它分枝杆菌菌型分析研究进展

蔡宏; 张曼夫; 《国外兽医学(畜禽传染病) 》 1998

关键词： 牛病 结核病 结核分枝杆菌 菌型

牛结构病流行病学和分子生物学研究进展

蔡宏; 《中国兽医杂志 》 1996 北大核心

关键词： 牛病 结核病 流行病学 分子生物学