精子载体介导法生产转基因绵羊的研究

武坚; 刘明军; 李文蓉; 黄俊成; 史洪才; 郭志勤; 《草食家畜 》 2001

摘要：采用精子载体介导法先后对 1 952只绵羊进行转基因试验 ,经PCR和South ern检测 1 592只后代中 ,转基因羊 1 0 3只 ,最高转基因效率达 9.86 % ;其中 2只转基因母羊乳汁中人胰岛素原基因表达量分别达 1 99.97mg/L和 1 83.6 2mg/L。荧光原位PCR结果证实牛、山羊和绵羊的精子经处理能携带外源基因 ,精子携带外源DNA的比率分别为 :绵羊 2 7.1 2 %、山羊 30 .57%、牛 31 .1 6 % ;同时外源基因进入到精子细胞并定位于核及其外周区域。研究还提示使用精子载体介导法时必须充分洗涤精液以除去精清 ,防止其中的DNase降解外源基因

关键词： 精子载体介导 转基因 乳腺表达 药用蛋白质

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人胰岛素原乳腺表达基因构建及其在转基因小鼠乳汁中的表达

刘明军; 武坚; 李文蓉; 黄俊成; 杨冬梅; 玛依拉; 郭志勤; 《草食家畜 》 2001

摘要：从绵羊和人的基因组中用PCR扩增分别克隆了羊乳球蛋白 (BLG) 5’和 3’调控区及人胰岛素原 (hINS)基因组DNA ,并以此为基础构建了人胰岛素原乳腺表达载体 ( pSh -BLG -hINS)。该表达载体包括 4.2kbBLG 5’调控区和 2 .1kbBLG 3’调控区 ,以及 1 .2kb人胰岛素原基因组DNA。将绿色荧光蛋白基因与BLG 5’和 3’调控区融合后转化乳腺细胞系 (TD47) ,通过荧光显微镜观察和紫外吸收检测 ,证明GFP在TD47乳腺细胞系中获得了表达。用BLG -hINS基因分别注射小鼠 ,通过PCR和限制性内切酶检测分析 ,共获得 5只转基因小鼠。经放免 (RIA)检测 ,两只转基因母鼠乳汁中人胰岛素原的表达量分别为 37.44和 39.99mg/L。该结果表明 ,本文所构建的 pBLG乳腺表达结构 ,能够调控外源基因在乳腺表达

关键词： 人胰岛素原 羊乳球蛋白 转基因 乳腺表达

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制苗用鸡大肠杆菌培养基及培养方法

成进; 谷文喜; 沙依然古丽; 依米提; 李文蓉; 《中国兽医学报 》 2001 北大核心 CSCD

摘要：采用通气搅拌培养方法对鸡大肠杆菌用 MM培养基和改良 MM培养基进行了对比试验 ,并用改良MM培养基对鸡大肠杆菌进行了静止培养、通气搅拌培养和连续通气搅拌培养的对比试验。结果显示 ,改良MM培养基培养的鸡大肠杆菌菌数和光密度 ( D)值明显高于 MM培养基 ;连续通气搅拌培养和通气搅拌培养的方法明显优于静止培养方法。

关键词： 鸡大肠杆菌 灭活疫苗 培养方法 培养基

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鹧鸪的养殖技术

郭立; 《中国禽业导刊 》 2001

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高寒山区羊群冷季定居补饲试验

付爱良; 贾广寿; 冰德艳; 桑格基; 《四川草原 》 2001

摘要：阐述了高寒山区羊群冬春定居补饲、定居暖圈补饲与定居放牧、放牧转场羊只的体重变化和死亡情况

关键词： 高寒山区 羊群 定居补饲

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采用限制性酶切片段长度多态性和PCR指印技术对牛结核分枝杆菌分型研究

蔡宏; 李淑霞; 呼西旦; 李君莲; 许苗; 朱玉贤; 《中国预防兽医学报 》 2001 北大核心 CSCD

摘要：5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌分离株的RFLP分型法结果与直接反向PCR分型法对上述分离株分型结果比较发现 :5株牛结核分枝杆菌分离株中有 2株具有相同的PCR指印带型 ,剩余 3株牛结核分枝杆菌分离株则PCR指印带型各不相同 ,上述结果显示出 ,直接反向PCR分型法较标准的RFLP分型法分型能力强。直接PCR法对新疆牛结核分枝杆菌分离株的分型结果显示出 ,PCR指印带型中带数较少 ,且与北京牛结核分枝杆菌分离株的PCR指印带型截然不同。

关键词： 牛结核分枝杆菌 插入序列 限制性酶切片段长度多态性 直接反向PCR分型

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利用PCR技术检测537份新疆结核病人痰标本中的结核分枝杆菌

蔡宏; 李君莲; 呼西旦; 李淑霞; 黄丽茜; 陈银华; 许苗; 朱玉贤; 《中国人兽共患病杂志 》 2001 北大核心 CSCD

摘要：目的　提高聚合酶链反应在检测人结核分枝杆菌中的特异性和敏感性。方法　在聚合酶链反应中对 4种DNA片段即结核杆菌特异插入序列IS6 110 ,IS10 81,和 16SrRNA ,6 5kDa摸板进行了比较 ;为获取较多的细菌DNA ,临床痰标本处理采用了国际标准化方法主要包括用一定量的N -乙酰 -L半胱胺酸和氢氧化钠处理痰标本 ;改进了RCR混和液的成份即添加了甘油 ,dUTP -尿嘧啶糖基化酶。结果　选择IS6 110作为结核杆菌特异性摸板用于检测细菌DNA ,制备出了 6批人结核杆菌PCR检测试剂盒 ,在对来自新疆结核病研究所的 5 37份痰标本的检测中发现 ,该试剂盒检测的特异性为 6 5 .97% ,敏感性为 93 .5 3 %。结论改良TB -PCR试剂盒显示有较高的敏感性 ,特异性还有待于进一步完善 ,该试剂盒在临床诊断中有一定的价值。

关键词： 结核分枝杆菌 痰标本 聚合酶链式反应 结核杆菌PCR检测试剂盒

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超数排卵处理对MOET核心群供体母牛繁殖性能影响的分析

陈静波; 罗应荣; 宣柏华; 张沅; 刘建强; 王安江; 朱顺国; 朱化彬; 许宗良; 龙福增; 赵传荫; 《草食家畜 》 2001

摘要：4年间从MOET核心群选择 1 30头优秀荷斯坦供体母牛 ,共 1 44个胎次 ,超排处理了 31 0头次。根据所得数据 ,分析了供体母牛超排后的繁殖性指标之间的关系及其影响。本试验供体母牛超排后的平均受胎天数为 1 0 4d ,本胎和下胎胎间距分别为 537d和 431d ,超排处理持续期对上述三项指标没有显著影响 (P >0 .0 5)。随重复超排次数的增加 ,供体母牛的胚胎移植犊牛数显著增加 (P >0 .0 1 ) ,配种指数和情期受胎率无显著差异 ,但淘汰率显著增加 (P <0 .0 1 ) ,超排 1、2、3次分别为4.1 7% ( 6 / 1 44 )、1 8.56 % ( 1 8/ 97)和 39.54 % ( 1 7/ 43)。淘汰牛中仅有约 1 / 3是因为 3次配种未孕而淘汰 ,其它主要是因为泌乳期延长 ,产奶量降低而淘汰。结果表明 ,超数排卵对供体母牛随后的配种受胎没有显著影响 ,但拖延了配种时间 ,加大了本胎胎间距

关键词： 供体母牛 超数排卵 繁殖性能 MOET育种

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犬类风湿性关节炎的防治

杨会国; 郭立; 艾比西; 《当代畜牧 》 2001

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不同成熟时间对牛卵母细胞发育及去核效率的影响

施巧婷; 黄俊成; 杨梅; 张家新; 王力虎; 李辉; 郭志勤; 《草食家畜 》 2001

摘要：本文研究了不同成熟时间对牛卵母细胞的体外成熟、体外受精及后期的体外培养的影响和不同成熟时间的极体出现率。结果表明 ,牛卵母细胞在成熟 16h时极体出现率达 69.3%、分裂率为 54.7%、囊胚率仅为 6.2 5% ;而成熟 2 4h时极体出现率达 76.9%、分裂率为 70 .0 %、囊胚率为2 7.7% ,差异均显著 (P <0 .0 5)。成熟 16h的卵母细胞刚刚排出第一极体 ,细胞核与极体非常近 ,此时去核率较高 ;而成熟 2 4h的卵母细胞细胞核已远离第一极体

关键词： 牛 卵母细胞 体外成熟 第一极体

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