文献类型： 中文期刊
作者： 田慧慧 1 ; 何小兵 1 ; 陈国华 1 ; 高真贞 1 ; 韦雨松 1 ; 俞宗佑 1 ; 房永祥 1 ; 米晓云 1 ; 景志忠 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室;榆林学院生命科学学院;中农威特生物科技股份有限公司;新疆畜牧科学院兽医研究所新疆动物疫病研究重点实验室
关键词： 牛cGAS;牛G3BP1;原核表达;第二信使分子;酶促反应
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2023 年 53 卷 012 期
页码： 1531-1536
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了探究牛G3BP1(bG3BP1)对DNA识别受体cGAS生物酶催化活性的影响,本研究提取牛血液淋巴细胞中总的RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,克隆出bG3BP1基因全长;随后构建bG3BP1的原核表达载体pET-28a-SUMO-bG3BP1,将其转化至大肠杆菌中进行诱导表达,使用镍亲和层析柱对重组蛋白bG3BP1进行纯化,并切除His6-SUMO标签后再经镍柱纯化;最后将获得的bG3BP1蛋白用于牛cGAS(bcGAS)的体外酶促反应,采用ELISA方法检测酶促合成产率.结果显示,可溶性表达的bG3BP1蛋白促进了 bcGAS的体外酶促反应,提高了第二信使分子2'3'-cGAMP的产率,这为2'3'-cGAMP的大规模生产及应用提供了研究思路和技术方法.
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