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巴斯德毕赤酵母多拷贝整合表达组装禽流感病毒样颗粒

文献类型： 中文期刊

作者： 薛倩 1 ; 马文戈 2 ; 沙依兰·卡依扎 2 ; 汪萍 2 ; 韩涛 2 ; 苗书魁 2 ; 夏俊 2 ; 陆桂丽 2 ;

作者机构： 1.新疆农业大学动物医学学院

2.新疆畜牧科学院兽医研究所/新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心

关键词： 禽流感病毒;多拷贝整合;病毒样颗粒

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2021 年 58 卷 011 期

页码： 2148-2156

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]构建多拷贝整合表达禽流感病毒样颗粒的重组巴斯德毕赤酵母,为H5 N1亚型禽流感基因工程疫苗提供基础.[方法]以巴斯德毕赤酵母GS115株18S rRNA基因(rDNA)部分序列,插入pPIC9K载体上XbaⅠ和Bsp1407Ⅰ位点间,构建多拷贝整合表达质粒p8K.再以禽流感病毒H5N1毒株基因组RNA为模板,RT-PCR扩增HA、M和NA基因,分别插入多拷贝载体p8K,构建表达质粒p8K-HA/M/NA.表达质粒分别扩增后线性化,按比例混合,电转化GS115感受态细胞.增菌后,经遗传霉素G418抗性平板筛选、PCR鉴定携带HA、M和NA基因序列的多拷贝整合菌株.阳性菌株增菌、诱导表达、高压均质破碎后,Western-blot检测表达产物.[结果]PCR鉴定阳性的重组菌株,其细胞裂解蛋白,免疫印迹试验可检测到与HA、M1和NA分子量一致的蛋白条带;电子显微镜可观察到大小约为80~120 nm的病毒样颗粒,免疫鸡能产生抗禽流感病毒中和抗体.[结论]重组毕赤酵母能够多拷贝整合、表达、组装禽流感病毒样颗粒.

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