文献类型： 中文期刊
作者： 姚楠 1 ; 白杰 2 ; 张雪梅 3 ; 吴卫东 3 ; 李文蓉 4 ;
作者机构： 1.石河子大学医学院
2.新疆畜牧科学院生物技术中心
3.新疆维吾尔自治区第二人民医院临床实验研究中心
4.新疆大学生命科学学院
关键词： BPI;原核表达;真核表达
期刊名称： 石河子大学学报(自然科学版)
ISSN： 1007-7383
年卷期： 2012 年 30 卷 05 期
页码： 70-75
摘要： 比较重组牛杀菌通透性增加蛋白(BPI)N端714bp编码序列的原核和真核表达载体在大肠杆菌和HEK293细胞中的表达,为进一步研究BPI蛋白N端的功能奠定基础。采用RT-PCR方法从牛的外周血中扩增出BPI蛋白N端的714bp基因片段,分别克隆至原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pLEX-MCS后,再分别转化大肠杆菌BL21菌株、感染HEK293细胞进行重组蛋白的表达。Western blotting检测重组BPI蛋白N端在原核和真核细胞中的表达。结果显示:BPI蛋白N端的原核表达载体pGEX-BPI714和真核表达载体pLEX-BPI714导入原核和真核细胞中均得到表达。Western blotting检测显示,重组GST-BPI714融合蛋白在大肠杆菌中仅能低水平表达,且大都以包涵体形式存在;相反,构建的真核表达载体pLEX-BPI714转染到HEK293细胞后,特异的目的蛋白能高效表达。本研究成功构建了牛源BPI714原核表达载体和真核表达载体,重组BPI714在大肠杆菌中表达不稳定,在HEK293细胞中能够稳定表达。
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