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7个shRNA分子对绵羊BMPR-1B基因的干扰作用分析

文献类型： 中文期刊

作者： 金贤华 1 ; 林嘉鹏 1 ; 白杰 1 ; 刘晨曦 1 ; 汪立芹 1 ; 阿米娜 1 ; 周川 1 ; 黄俊成 1 ;

作者机构： 1.新疆动物生物技术重点开放实验室

关键词： BMPR-1B基因;shRNA;HEK293细胞;慢病毒

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2012 年 28 卷 03 期

页码： 131-137

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得有效干扰绵羊BMPR-1B基因的shRNA干扰分子,从绵羊卵巢组织中扩增了1 515 bp BMPR-1B基因全长编码区cDNA序列,添加HA标签序列后,插入Plex-mcs慢病毒质粒,构建Plex-BMPR-1B慢病毒表达载体,转染HEK293细胞,并与2个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,用获得的重组慢病毒感染HEK293细胞;同时,将7个干扰分子与Pll-LentiLox 3.7载体重组,并与3个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,获得干扰分子的重组病毒颗粒。最后用干扰分子重组的病毒颗粒感染整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞,进行qRT-PCR和Western blot检测。结果显示:重组BMPR-1B蛋白质在稳定整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞系中获得了表达;研究中设计的7个shRNA分子能抑制绵羊BMPR-1B基因表达水平68.30%～99.86%,其中PLL-BMPR-1B-1306和PLL-BMPR-1B-1475干扰分子的干扰效果最好。

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