文献类型： 中文期刊
作者： 王慧 1 ; 侯秋莲 1 ; 张壮志 2 ; 张富春 1 ; 张文宝 2 ;
作者机构： 1.新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室
2.新疆畜牧科学院兽医研究所
关键词： 细粒棘球绦虫;硫氧还蛋白过氧化物酶;融合蛋白;抗血清
期刊名称： 中国人兽共患病学报
ISSN： 1002-2694
年卷期： 2008 年 24 卷 05 期
页码： 430-434
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 目的克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增EgTPx基因,克隆到原核表达载体pET-41b中,转化大肠杆菌BL21,经过IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,通过谷胱甘肽Sepharose4B层析柱分离纯化获得重组蛋白并免疫小鼠,制备抗血清。Western blot鉴定抗血清的特异性,ELISA测定抗体的效价。结果用PCR方法扩增获得的EgTPx基因长度为582bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgTPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为54kDa,鼠抗EgTPx抗体能与融合蛋白和天然原头蚴抗原发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶256000。结论成功地制备了鼠抗EgTPx抗体,并能够特异识别原核表达的融合蛋白EgTPx和天然原头蚴抗原,为研制有效的包虫病疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。
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