文献类型： 中文期刊

作者： 王慧 ¹ ; 李军 ² ; 张富春 ³ ; 张文宝 ⁴ ; 温浩 ⁵ ;

作者机构： 1.军事医学科学院微生物流行病研究所

2.新疆医科大学基础医学院新疆医科大学第一附属医院

3.新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室

4.新疆畜牧科学院兽医研究所

5.新疆大学生命科学与技术学院

关键词： 细粒棘球绦虫;硫氧还蛋白过氧化物酶;毕赤酵母;分泌表达;抗氧化

期刊名称： 中国病原生物学杂志

ISSN： 1673-5234

年卷期： 2014 年 03 期

页码： 220-224

收录情况： CSCD

摘要： 目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性。结果酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性。结论在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性。