文献类型： 中文期刊
作者： 李娜 1 ; 吴建勇 2 ; 李建军 2 ; 杨学云 2 ; 王登峰 2 ; 段新华 2 ; 王治才 2 ;
作者机构： 1.石河子大学动物科技学院
2.新疆畜牧科学院兽医研究所
关键词： 产气荚膜梭菌;α毒素;克隆;表达
期刊名称： 中国畜牧兽医
ISSN： 1671-7236
年卷期： 2012 年 39 卷 12 期
页码： 10-13
收录情况： 北大核心
摘要： 为建立产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)α毒素(cpa)克隆表达方法,应用PCR方法从羊源D型产气荚膜梭菌中扩增cpa成熟肽基因序列,将其插入pET-28b载体中,构建重组表达载体pET-28b-cpa;通过PCR扩增、双酶切和测序方法对重组载体进行鉴定及序列分析,然后转入BL21(DE3)pLysS中诱导表达;用SDS-PAGE检测目的蛋白大小及分布,Western blotting方法检测其反应原性。结果表明,所扩增的cpa基因大小为1110 bp,与GenBank参考序列同源性为99%以上;SDS-PAGE分析结果表明,目的蛋白大小为41.2 ku,与预期大小一致,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但主要以包涵体为主,两者分布均具有和天然毒素相似的反应原性。
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