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双元选择标记载体在奶山羊胎儿成纤维细胞的整合与表达

文献类型： 会议论文

第一作者： 李文蓉

作者： 李文蓉 1 ; 谭立新 1 ; 牛志刚 1 ; 胡艳秋 2 ; 侯颖 3 ; 郭志勤 1 ;

作者机构： 1.新疆畜牧科学院农业部家畜繁育生物技术重点开放实验室,新疆,乌鲁木齐,830046

2.新疆农业大学农学院,新疆,乌鲁木齐,830046

3.新疆大学生命科学与技术学院,新疆,乌鲁木齐,830046

关键词： 奶山羊胎儿;成纤维细胞;双元选择标记载体;转基因;基因克隆

会议名称： 第五届国际转基因动物学术研讨会

主办单位： 南方医科大学

页码： 106-111

摘要： 本文利用体细胞核移植技术生产转基因克隆家畜能大大提高转基因家畜的生产效率、降低研究和生产的成本,实现这一目标的前提是获得稳定整合外源基因的体细胞.自人工引产的奶山羊胎儿耳皮肤组织分离培养成纤维细胞,经脂质体介导,将含绿色荧光蛋白基因(EGFP)和新霉素磷酸转移酶基因(neo)双元标记因导入其中,筛选获得携带外源基因的转基因细胞克隆.运用流式细胞技术,对稳定转染后表达EGFP的细胞数量及其荧光强度进行定量分析,其中89.8℅细胞表达了EGFP;采用PCR,对稳定转染获得的细胞克隆进行外源基因的整合检测,证实EGFP基因已整合到细胞的基因组中;对转染细胞的生长活力和染色体倍型变异率测定等分析表明,整合和表达了外源基因的转基因细胞保持了正常细胞的生长特性.这不仅说明建立的奶山羊胎儿成纤维细胞转基因体系是可行的,而且为开展转基因克隆家畜的生产提供了供核细胞.

分类号： Q813`Q786`S814.6

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