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一种用于卵周隙内注射慢病毒生产转基因羊的方法

专利类型： 中国发明申请

专利权人： 新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国—澳大利亚绵羊育种研究中心

发明人： 黄俊成;汪立芹;刘明军;赵云程;陈童;林嘉鹏;王静

专利号： CN200910113566.4

摘要： 本发明提供一种用于卵周隙内注射慢病毒生产转基因羊的方法，将慢病毒载体与病毒包装质粒共转染为293T细胞，至48小时后离心，得慢病毒的浓缩液，将其注射于成熟24-25小时的卵母细胞卵周隙内，与精子结合实施体外受精，12小时后置于培养液中培养，48小时后统计卵裂率和转基因率。其一取卵母细胞用体外成熟液洗涤3-4次，按25-30枚/滴入体积75-78μl/滴的体外成熟培养液，在5％CO2、95％下培养；其二体外成熟的卵母细胞脱去卵丘细胞，慢病毒注射入细胞卵周隙内，用体外受精液洗涤2-4次，按25-30枚/滴入受精液内；解冻精液，移入受精液，离心弃上清液，沉淀精子加受精液滴，孵育；取受精12-18小时的卵，按上步处理后入四孔培养板内培养即可；其三为药剂慢病毒液、抽卵液、成熟液、显微操作液、SOF、受精液、培养液、养血清的必备。

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