小反刍兽疫病毒N蛋白原核表达条件的优化及反应活性

苗书魁; 汪萍; 魏玉荣; 陆桂丽; 米晓云; 夏俊; 沙依兰·卡依扎; 魏婕; 王延; 李金娜; 马文戈; 黄炯; 《中国微生态学杂志 》 2019 CSCD

摘要：目的探讨小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)N蛋白原核表达、条件优化及反应活性。方法参照GenBank中PPRV (Nigeria/75/1)N基因序列,人工合成该基因,构建重组表达质粒pET-30a (+)-N,转化至BL21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳、Western-blot分析。在不同温度、时间、IPTG浓度条件下诱导表达N蛋白,确定最佳表达条件。结果 PPRV N蛋白(64.4kD)成功表达,能被羊PPRV免疫血清所识别。N蛋白主要以包涵体存在,其最佳诱导条件:诱导温度28℃、IPTG终浓度2.0mmol/L、诱导时间16h。结论原核表达的PPRV N蛋白具有良好的特异性和反应活性,为单克隆抗体的制备及快速诊断方法的建立提供了技术资料。

关键词： 小反刍兽疫病毒 N蛋白 原核表达 反应活性