绵羊基质Gla蛋白基因克隆、表达谱及其在卵巢组织的定位

张欣如; 古丽米热·阿不都热依木; 陈莹; 马秀玲; 林嘉鹏; 汪立芹; 黄俊成; 吴阳升; 《江苏农业学报 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：本研究旨在克隆绵羊基质Gla蛋白(MGP)基因的蛋白质编码序列(CDS),制备特异抗体，并检测该基因在绵羊卵巢组织中的表达分布。以卵泡总cDNA为模板，扩增获得绵羊MGP基因CDS区全长序列；合成绵羊MGP蛋白C末端15个氨基酸长度的多肽，免疫小鼠，制备抗血清；利用实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹技术分析其在不同组织和不同大小的卵泡中的表达水平；通过免疫组织化学方法分析其在卵巢组织中的表达分布特征。结果表明，成功获得绵羊MGP基因的CDS区全长片段(467 bp),编码103个氨基酸，理论相对分子量为12 230.96,等电点为9.27;N末端19个氨基酸序列被预测为信号肽序列，成熟肽有84个氨基酸，为外泌性蛋白质，无胞内区；MGP总蛋白质氨基酸序列与山羊、牛的同源蛋白质相似性分别为100.0%、99.0%,与人、小鼠的相似性均为85.4%。MGP mRNA和蛋白质在绵羊心、肝、脾、肺、肾等组织中的相对表达量较低，在卵巢、输卵管、子宫等生殖系统或组织中的相对表达量较高，在黄体中的相对表达量也较高；MGP在卵巢组织颗粒细胞、卵丘细胞中均有表达，但在闭锁卵泡中不表达。本研究结果可为进一步研究MGP在卵巢组织中的生物学功能提供参考。

关键词： 基质Gla蛋白 绵羊 卵巢 颗粒细胞 黄体