科研产出
不同毛色巴什拜羊皮肤组织中10个候选基因表达水平分析
《中国草食动物科学 》 2024 北大核心
摘要：为探讨可能影响动物毛色的10个候选基因（TCF25、TYR、TYRP1、ASIP、KIT、MITF、EDNRB、SLC7A11、MC1R和DCT）与巴什拜羊毛色的关系，利用实时荧光定量PCR技术对30只1周岁不同毛色（棕色、白色和黑色各10只）被毛的巴什拜羊皮肤组织中与毛色相关基因的mRNA表达量进行了研究，所有数据使用SPSS 23.0进行单因素方差分析。结果显示，在不同毛色被毛巴什拜羊皮肤中，TCF25、ASIP和EDNRB基因在白色被毛皮肤中的表达量均显著高于黑色和棕色被毛皮肤（P ＜0.05）;TYR、TYRP1、DCT和MC1R基因在黑色被毛皮肤中的表达量均显著高于白色和棕色被毛皮肤（P ＜0.05）;MITF基因在棕色被毛皮肤中的表达量显著高于白色和黑色被毛皮肤（P ＜0.05），而KIT和SLC7A11基因在不同毛色皮肤组织中均无显著差异（P＞ 0.05）。综上可知，TCF25和ASIP基因主要与巴什拜羊白色被毛性状相关，TYR、TYRP1、DCT和MC1R主要与巴什拜羊黑色被毛性状相关，而MITF和EDNRB基因参与调控巴什拜羊棕色和白色被毛性状的具体作用机制还有待进一步探究。
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鉴别蓝舌病病毒血清29型RT-PCR与qRT-PCR方法的建立与应用
《中国兽医科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为建立快速鉴别蓝舌病病毒血清29型(BTV-29)的方法,根据BTV-29型毒株基因节段2(Seg-2)的序列特征,分别设计用于RT-PCR与q RT-PCR方法的特异性引物与Taq Man探针,通过试验确定其敏感性,用BTV-1～BTV-24等核酸作为对照评价其特异性。对BTV-29感染动物血液样本中的病毒核酸进行监测,并用BTV群特异q RT-PCR方法验证其可靠性。结果显示,建立的BTV-29特异RT-PCR的灵敏度是1.12×10~2 copies/μL,而BTV-29特异q RT-PCR的灵敏度是1.12×10~1 copies/μL,均与BTV-1～BTV-24、流行性出血病病毒、帕利亚姆病毒和阿卡斑病毒之间无交叉反应;用BTV-29特异q RT-PCR检测BTV-29型感染山羊血液中的BTV-29核酸的动态变化,结果与BTV群特异q RT-PCR检测结果基本一致。本研究建立的BTV-29特异RT-PCR和q RT-PCR方法均具有良好的特异性和较高的灵敏度,能快速鉴别BTV-29,为BTV-29的致病性、诊断与流行病学研究提供了技术保障。
关键词： 蓝舌病病毒 BTV血清29型 血清型鉴定 qRT-PCR RT-PCR
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绵羊FGF10基因克隆、序列分析及其在毛囊发育中的表达分析
《中国畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：本试验旨在获得中国美利奴羊成纤维细胞生长因子10（fibroblast growth factor 10,FGF10）基因的编码区（CDS）全长序列并进行生物信息学分析,随后对FGF10基因在中国美利奴羊毛囊发育过程中的表达特征进行分析,明确其在中国美利奴羊毛囊发育过程中的表达模式,为进一步研究FGF10 mRNA表达水平与中国美利奴羊毛囊生长发育的表达调控机制奠定理论基础。采用PCR扩增获得中国美利奴羊FGF10基因CDS,并克隆到zero PCR@TM-Blunt进行测序验证;利用实时荧光定量PCR技术检测FGF10在中国美利奴羊毛囊发育过程中的表达差异。结果表明,绵羊FGF10基因CDS长度为696 bp（序列上传GenBank,获得登录号:MT872422）,编码231个氨基酸,与牛和山羊的氨基酸序列同源性达100%,存在1个信号肽和1个跨膜结构域,其为分泌通路信号蛋白;实时荧光定量PCR分析表明,FGF10基因在中国美利奴羊毛囊发育过程中均表达,在毛囊发育第85天表达最高,显著高于其他毛囊发育时期（P<0.05）。本研究获得中国美利奴羊FGF10基因完整的编码区序列和毛囊发育过程中的表达特征,生物信息学分析发现,FGF10基因编码区序列具有物种间的保守性,同时FGF10在绵羊毛囊不同发育阶段的皮肤组织中表达,由此表明,FGF10基因可能在绵羊毛囊的生长发育过程中发挥重要的生物学作用。
关键词： 中国美利奴羊 FGF10基因 克隆 实时荧光定量PCR 毛囊
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细粒棘球绦虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国人兽共患病学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：目的为建立高效、特异的细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus,Eg）检测方法。方法本研究设计了一组基于Eg线粒体基因的特异性引物和TaqMan探针,通过反应体系及条件的优化,建立了Eg荧光定量PCR检测方法。结果该方法线性关系好,灵敏度高,在109～102拷贝/μL相关系数达0.998,灵敏度达102拷贝/L;在特异性试验中,与其他病原虫株无交叉反应,特异性较好;重复性试验变异系数均低于3%。应用该方法对50份临床样品进行检测,发现6份为Eg感染阳性。结论由此可见,建立的荧光定量PCR方法可快速、灵敏、特异地检测细粒棘球绦虫,具有一定的实际应用价值。
关键词： 细粒棘球绦虫 TaqMan探针 实时荧光定量PCR
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多房棘球绦虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为建立高效、特异的多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis,E.m）检测方法,本研究设计了1组基于E.m线粒体NADH脱氢酶亚基3（NADH3）基因的特异性引物和TaqMan探针,通过对反应体系及条件进行优化,建立了E.m荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法线性关系好,灵敏度高,在109～101 拷贝/μL相关系数达0.998,灵敏度达10拷贝/μL;在特异性试验中,与其他病原虫株无交叉反应,特异性较好;重复性试验（组间和组内）的变异系数均小于3%。应用建立的方法对采集的50份临床样品进行检测,发现9份为E.m感染阳性。由此可见,建立的荧光定量PCR方法可用于泡型包虫病（alveolar echinococcosis, AE）的快速检测、定量分析及流行病学调查。
关键词： 多房棘球绦虫 TaqMan探针 实时荧光定量PCR
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苏博美利奴羊毛囊发育不同时期皮肤组织LncRNAs及其靶基因的差异表达
《农业生物技术学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：长链非编码RNA (long noncoding RNA, LncRNA)参与哺乳动物多种生物学过程,目前研究其在毛囊形成过程中的作用机制却相对较少,因此研究LncRNA对毛囊发育的影响成为了解毛囊形成生物学过程的新方向。为验证前期获得的苏博美利奴羊(Ovis aries)毛囊发育不同时期皮肤组织的RNA-Seq结果以及与预测靶基因表达量差异,本研究利用qRT-PCR技术检测了在苏博美利奴羊毛囊发育6个关键时期两种在皮肤组织中差异表达且靶基因与毛囊发育相关的LncRNA 00202353和LncRNA 00316173及其靶基因的表达情况。结果表明,LncRNA 00202353及其靶基因分泌型卷曲相关蛋白2 (secreted frizzledrelated protein 2, SFRP2)的表达量在胚胎期85 d极显著高于胚胎期65 d、胚胎期135 d、出生后7 d和出生后30 d的表达量(P<0.01);LncRNA 00316173及其靶基因胰岛素样生长因子2 (insulin-like growth factor2, IGF2)的表达量在胚胎期65 d时极显著高于胚胎期135 d、出生后7 d和出生后30 d的表达量(P<0.01);将苏博美利奴羊毛囊发育时期分为发育期和成熟期进行分析,发现LncRNA 00202353及其靶基因SFRP2与LncRNA 00316173及其靶基因IGF2的表达量在毛囊发育期极显著高于毛囊成熟期(P<0.01),研究表明LncRNA 00202353与LncRNA 00316173及其靶基因参与毛囊的发育过程。本研究结果对后期深入研究LncRNA对毛囊发育的研究具有重要的参考价值,也为探究超细毛羊毛囊周期性变化的生物学过程提供研究线索。
关键词： 苏博美利奴羊 毛囊发育 长链非编码RNA(LncRNA) qRT-PCR
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Ghrelin及其受体和酰基化酶在羔羊不同组织的表达差异研究
《动物医学进展 》 2018 北大核心
摘要：采用real-time PCR检测生长激素释放肽(Ghrelin)及其受体(GHS-R)和酰基化转移酶(GOAT)在羔羊下丘脑、垂体、瘤胃、皱胃底、皱胃窦、十二指肠、空肠、回肠、心、肝、脾、肾、胰腺、睾丸的mRNA表达水平。结果显示,Ghrelin、GHS-R和GOAT mRNA在羔羊各组织中均有表达,其中Ghrelin mRNA主要表达于皱胃底(P<0.01),其次是十二指肠和胰腺(P<0.05);GHS-R mRNA主要表达于垂体(P<0.01),其次是下丘脑(P<0.05);GOAT mRNA在皱胃底和睾丸的表达水平相对较高,均显著高于其他组织(P<0.05)。研究结果表明,Ghrelin系统在反刍动物组织中广泛分布,Ghrelin可能与GHS-R和GOAT共同参与协调羔羊生长调控、摄食等功能的调节作用,为进一步研究反刍动物体内Ghrelin的生物学功能奠定了基础。
关键词： 羔羊 生长激素释放肽 生长激素促分泌素受体 Ghrelin酰基化转移酶 实时荧光定量PCR
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不同年龄马睾丸组织中miRNA-34家族含量的变化
《动物医学进展 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为研究microRNA(miRNA)-34家族在马不同发育阶段睾丸组织内的表达规律,应用实时荧光定量PCR方法,以GAPDH作为内参基因,分别对miRNA-34家族(miRNA-34a、miRNA-34b和miRNA-34c)在3个发育阶段哈萨克马睾丸组织表达情况进行检测。结果表明miRNA-34a在马睾丸发育过程中表达量较为稳定,在不同发育阶段睾丸组织内无显著差异(P>0.05)。miRNA-34b和miRNA-34c在马驹和周岁马睾丸组织中的表达量较低,在这两个年龄段表达量无显著差异(P>0.05)。而在成年马阶段出现明显上升,成年马miRNA-34b和miRNA-34c表达量与马驹和周岁马表达量有极显著的差异(P<0.01)。位于同一基因簇上的miRNA-34b和miRNA-34c具有极为类似的表达模式和结构,分析认为马的miRNA-34b和miRNA-34c也具有冗余功能。
关键词： 哈萨克马 miRNA-34家族 实时荧光定量PCR
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基因表达差异对牛胚胎发育潜能的影响
《动物医学进展 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：随着牛胚胎体外生产(IVP)技术的不断成熟,体外胚胎生产在一些国家已进入商业化运营阶段。但与体内胚胎相比其移植受体妊娠率、产犊率及胎儿的后天发育能力均较差。因此,开发一种既可靠又实用的检测胚胎发育潜能的技术显得尤为重要。应用实时荧光定量PCR技术检测早期胚胎基因表达,通过分析mRNA的表达丰度来评价卵母细胞成熟情况和胚胎质量是一种可行的方法。论文综述了国内外有关牛卵母细胞成熟和早期胚胎发育过程中部分基因mRNA表达状况,分析了基因表达与胚胎潜能的关系。
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