科研产出
口蹄疫病毒表位嵌合蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达
《中国兽医科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了将口蹄疫病毒(FMDV)中和表位展示在病毒样颗粒(VLP)表面,以猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白为骨架,用FMDV O/Mya-98/2010毒株G-H环替换PCV2自身中和表位,构建嵌合衣壳蛋白CaO。为分泌表达CaO蛋白,在芽胞杆菌穿梭质粒pHCMC05的多克隆位点中顺次插入枯草芽胞杆菌P43启动子和中性蛋白酶B分泌信号肽(nprBsp),构建分泌型大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒p7257-P43。然后将合成的CaO基因插入p7257-P43质粒nprBsp的下游,构建分泌表达质粒p7257-P43-CaO。将该质粒转化枯草芽胞杆菌WB800,氯霉素诱导表达。上清经SDS-PAGE检测,嵌合蛋白CaO在枯草芽胞杆菌中得到表达。Western-blot证实,该蛋白具有反应原性。免疫电镜可观察到直径约15nm±2nm的VLP,表明嵌合蛋白在体外能有效组装。
关键词： 口蹄疫病毒 表位嵌合蛋白 猪圆环病毒2型 枯草芽胞杆菌
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口蹄疫病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达系统的构建
《动物医学进展 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)双层结构病毒样颗粒,选择牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行株BVDV JZ05-1核心蛋白p14的第169~270位氨基酸和FMDV Asia 1/JS/CHA/05结构蛋白VP1的第1~211位氨基酸,两者之间设计柔性肽连接,人工合成p14-柔性肽-VP1融合蛋白编码序列,全基因长990bp。合成基因与枯草芽胞杆菌表达载体p7257-P43连接,构建成表达质粒p7257-P43-P14-VP1。转化枯草芽胞杆菌WB800,经筛选、鉴定,获得表达p14-VP1融合蛋白的枯草芽胞杆菌。该重组表达菌在含有40μg/mL氯霉素的LB中培养后,菌体超声破碎可检测到目的蛋白。Western blot结果显示,该蛋白能特异性识别Asia 1型FMDV抗体,具有良好的反应原性。电镜观察显示,融合蛋白组装为直径约50nm大小的病毒样颗粒(VLP)。
关键词： Asia 1型口蹄疫病毒 病毒样颗粒 融合蛋白 枯草芽胞杆菌
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