牛G3BP1蛋白的原核表达及其对牛cGAS生物酶催化活性的影响

田慧慧; 何小兵; 陈国华; 高真贞; 韦雨松; 俞宗佑; 房永祥; 米晓云; 景志忠; 《中国兽医科学 》 2023 北大核心 CSCD

摘要：为了探究牛G3BP1(bG3BP1)对DNA识别受体cGAS生物酶催化活性的影响,本研究提取牛血液淋巴细胞中总的RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,克隆出bG3BP1基因全长;随后构建bG3BP1的原核表达载体pET-28a-SUMO-bG3BP1,将其转化至大肠杆菌中进行诱导表达,使用镍亲和层析柱对重组蛋白bG3BP1进行纯化,并切除His6-SUMO标签后再经镍柱纯化;最后将获得的bG3BP1蛋白用于牛cGAS(bcGAS)的体外酶促反应,采用ELISA方法检测酶促合成产率.结果显示,可溶性表达的bG3BP1蛋白促进了 bcGAS的体外酶促反应,提高了第二信使分子2'3'-cGAMP的产率,这为2'3'-cGAMP的大规模生产及应用提供了研究思路和技术方法.

关键词： 牛cGAS 牛G3BP1 原核表达 第二信使分子 酶促反应