科研产出
牛结核杆菌DNA疫苗的纯化工艺研究及质量鉴定
《中国畜牧兽医 》 2011 北大核心
摘要：为获得纯度较高,能进行动物免疫试验的DNA疫苗,在高密度发酵工程菌的基础上,通过传统的碱裂解,获得粗提的质粒;用氯化钙去除裂解液中的大部分RNA,并用Sartobran P囊式过滤器获得了澄清的溶液。用聚乙二醇法沉淀超螺旋质粒DNA,去除大部分菌体蛋白和宿主DNA。最后用source 30Q阴离子交换色谱填料去除几乎全部的内毒素并浓缩了质粒。本试验纯化的DNA疫苗经质量检验达到了转染动物的要求。该工艺实现了一步色谱纯化DNA疫苗的目的,具有工艺简单、快速的优点。
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牛结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的原核表达和纯化
《草食家畜 》 2010
摘要：构建牛结核分枝杆菌ESAT-6基因的原核表达载体,诱导表达、纯化并初步鉴定该蛋白。方法:以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增ESAT-6基因,产物通过双酶切克隆入pET-22b(+)质粒,经PCR、酶切、测序等方法鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)polys菌体,经IPTG诱导表达蛋白;利用Western-blot鉴定重组蛋白后,纯化目的蛋白。结果:所获得ESAT-6基因序列与GenBank公布的完全一致。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现在6kDa处有特异性蛋白条带。纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准比较一致。结论:成功表达纯化并鉴定构建了ESAT-6融合蛋白。
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金黄色葡萄球菌8型荚膜多糖的提取纯化及其反应原性
《中国兽医科学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：为获取金黄色葡萄球菌8型荚膜多糖(CP8),采用高压破碎菌体释放荚膜多糖,酶处理去除核酸和蛋白,再通过离子交换层析进一步纯化得到CP8荚膜多糖,并对荚膜多糖的纯度和反应原性进行了检测。结果显示,得到的荚膜多糖纯度为63.83%,净产量为6.23 mg/L。用免疫琼脂双扩散试验检测,结果纯化的CP8仅与CP8抗血清反应,反应原性在pH2.5~11.5范围内稳定。表明,获得的CP8荚膜多糖具有较高的纯度和良好的反应原性,可用于制备载体蛋白-荚膜多糖完全抗原,研发有效的预防金黄色葡萄球菌疫苗。
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