兔脊柱结核模型的构建

刘正文; 呼西旦; 付明花; 折胜利; 罗兰; 宋兴华; 《中华实验外科杂志 》 2012 北大核心 CSCD

摘要：目的 在兔腰椎椎体钻孔种植人型H37 Rv结核标准菌株构建兔脊柱结核模型.方法 对16只兔腰5椎体上方钻孔,填充明胶海绵,吸附结核菌混悬液0.1 ml(菌量:5g/L)骨蜡封闭钻孔,在术后不同时间段行大体观察、影像学、组织病理学、细菌学等检查.结果 16只大白兔中,其中13只兔腰椎椎体感染结核菌后,局部反应较明显,全身反应较轻,完成实验;3只未感染结核杆菌.在感染的大白兔中,2只出现消瘦、厌食等症状;术后1个月X线阳性4只,术后2个月X线阳性8只、CT阳性12只、MRI阳性13只;感染大白兔的椎体、椎旁软组织切片苏木素-伊红(HE)染色示有脓细胞、类上皮样细胞或坏死灶等形成,对形成的脓肿进行脓液培养显示69.2%结核分枝杆菌生长.建立模型成功率为69.2%.结论 通过在兔脊柱椎体局部进行适当剂量H37 Rv结核标准菌株的种植感染,可构建出与人类脊柱结核病理变化相似的兔脊柱结核.

关键词： 脊柱结核 结核分枝杆菌 模型,动物

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结核分枝杆菌三价DNA疫苗在奶牛体内诱导的免疫应答

张云峰; 刘福元; 蔡宏; 呼西旦; 徐雪萍; 《新疆农业科学 》 2011 北大核心 CSCD

摘要：【目的】研究结核分枝杆菌Ag85B、MPB64和MPT83抗原DNA疫苗在奶牛体内诱导的免疫应答。【方法】以PJW4303为载体,构建上述3种抗原基因的三价DNA疫苗,免疫6月龄荷斯坦奶牛3次。ELISA法检测免疫奶牛的特异性抗体滴度。利用双抗夹心ELISA定量测定免疫奶牛各月IFN-γ浓度。【结果】免疫前奶牛体内特异性抗体为阴性,1免2、免后抗体效价上升较缓,3免后抗体效价上升快。MPT83特异性抗体上升最快,抗体效价1∶3 200持续6个月;Ag85B特异性抗体效价1∶3 200持续2个月;MPT64特异性抗体效价较低。免疫奶牛中MPT83、Ag85B、MPT64三种蛋白诱导产生IFN-γ在3免后6个月到达最高,浓度分别为(1 098.95±165.03)(、711.45±110.43)(、355.06±72.76)pg/mL,阴性对照组PBS刺激IFN-γ浓度为(114.5±27.46)pg/mL。阴性对照与三种抗原相比,差异均极显著(P<0.01)。【结论】多价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答,可能有利于增强疫苗对抗结核病的抗性。

关键词： 结核分枝杆菌 Ag85B MPB64 MPT83 DNA疫苗 免疫应答

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结核分枝杆菌三价DNA疫苗的体液免疫与细胞免疫应答

张云峰; 刘福元; 蔡宏; 呼西旦; 宋振忠; 徐雪萍; 《中国兽医科学 》 2011 北大核心 CSCD

摘要：为研究结核分枝杆菌Ag85B、MPT64和MPT83抗原DNA疫苗在奶牛体内诱导的免疫应答,以PJW4303为载体,构建了上述3种抗原基因的三价DNA疫苗。采用阴离子交换色谱方法提取3种质粒,混合后添加佐剂DDA免疫3月龄荷斯坦奶牛3次,采用ELISA法检测免疫奶牛的特异性抗体效价。利用双抗夹心ELISA定量测定免疫奶牛各月的IFN-γ浓度。结果显示,纯化后的DNA疫苗经质量检验达到动物免疫试验的要求;免疫前奶牛体内特异性抗体为阴性;三免后第30天MPT83、Ag85B和MPT64特异性抗体效价达到最高,均值分别为1∶3 200、1∶2 560和1∶2 880;同时免疫奶牛MPT83、Ag85B、MPT64三种蛋白诱导产生的IFN-γ在三免后第30天达到最高,分别为(630.25±94.45)、(341.65±76.75)、(51.38±9.80)pg/mL,阴性对照组PBS的IFN-γ浓度为(6.48±20.88)pg/mL。每个月的阴性对照与3种抗原相比,差异均极显著(P<0.01)。证实该三价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答,可能有利于增强疫苗对结核病的抗性。

关键词： 结核分枝杆菌 阴离子交换色谱 DNA疫苗 免疫应答

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结核分枝杆菌组合DNA疫苗的免疫效果

潘怡; 蔡宏; 李淑霞; 田霞; 李唐; 朱玉贤; 《生物化学与生物物理学报 》 2003 SCI 北大核心 CSCD

摘要：以编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B、ESAT 6和MPT6 3的基因为插入片段 ,构建核酸疫苗联合免疫小鼠。以原核表达纯化的抗原为检测物 ,检测了抗原特异性的抗体和γ 干扰素的形成。研究表明 ,组合核酸疫苗第 3次免疫后 2 1天 ,实验小鼠血清中Ag85B抗体滴度达到 10 5以上 ,Ag85B抗原刺激产生的特异性γ 干扰素达到 (17.0± 7.0 )u/ml。组合疫苗虽然没有提高小鼠血清中ESAT 6及MPT6 3蛋白的特异性抗体滴度 ,但仍显著刺激产生了两种特异性的 γ 干扰素。攻毒实验表明 ,经组合疫苗免疫后小鼠肺部结核杆菌数量显著下降。肺部切片显示 ,免疫小鼠病理状况较对照组有明显改善。因此 ,研究提示Ag85B等组合核酸疫苗具有较好的结核病预防效果。

关键词： 结核分枝杆菌 分泌蛋白 DNA疫苗 保护力

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结核分枝杆菌DNA三价苗的细胞与体液应答研究

蔡宏; 田霞; 李淑霞; 胡勤; 朱玉贤; 《中国人兽共患病杂志 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：本文构建了含分枝杆菌抗原Ag85B(30kDa) ,MPT - 83(2 6kDa)和ESAT - 6 (6kDa)分泌蛋白的真核表达载体pJW 4 30 3,酶切鉴定和序列分析 ,确定含有正确的读码框。重组表达质粒导入COS7细胞内并瞬时表达 ,证明上述三种重组质粒能在COS7细胞中表达出特异蛋白。三种重组表达质粒同时肌注免疫小鼠 ,首免 ,二免和三免小鼠后 2 1dAg85B抗体平均滴度分别为 1∶32 0 0 ,1∶5 12 0 0和 1∶10 2 4 0 0 ,MPT - 83抗体平均滴度二次免疫和三次免疫后 2 1d测得为 1∶2 5和 1∶5 0 ,三次免疫后均未检测到ESAT - 6特异性抗体。在三免后 2 1dAg85B和MPT - 83的特异性细胞因子γ -干扰素的浓度分别 2 75 pg/ml±16 5 ,2 2 0 pg/ml± 19 8;而ESAT - 6的γ -干扰素浓度为 2 2 0 pg/ml± 9 9。本研究表明 ,多价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答 ,可能有利于增强疫苗对抗结核病的抗性。

关键词： 结核分枝杆菌 Ag85B、MPT-83和ESAT-6分泌蛋白抗原 三价DNA疫苗 免疫原性

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结核分枝杆菌四联核酸疫苗免疫原性和保护效率

蔡宏; 田霞; 呼西旦; 潘怡; 李国利; 庄玉辉; 朱玉贤; 《中国科学(C辑:生命科学) 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：对结核杆菌四联DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价。用结核分枝杆菌Ag85B,MPT-64,MPT-63和ESAT-6等4个分泌蛋白基因的表达载体首次免疫小鼠21d后,Ag85B抗体滴度达到1:200,二次免疫后为1:102400,三次免疫后为1:1288。MPT-64和MPT-63的抗体滴度在首次免疫21d后即高达1:25600,二、三次免疫后呈下降趋势。三次免疫21d后均未检测到ESAT-6的特异性抗体。用该DNA四联苗免疫小鼠后,4种蛋白都诱导脾脏细胞产生较高水平的细胞应答(产生了特异性γ-干扰素)。三次免疫后经静脉强毒攻击,四联苗免疫组小鼠肺脏的细菌数比对照空载体组减少了99.8％,保护水平显著高于BCG疫苗组、对肺组织的病理形态特征观察表明,空载体pJW4303的对照小鼠,肺部严重损伤,肺实质干酪样坏死,坏死结节占肺实质的50％～70％,而四联苗免疫的小鼠,肺组织结构正常,实质无肉芽肿,肺泡轮廓清晰。研究证实,Ag85B,MPT-64,MPT-63和ESAT-6四种分泌蛋白编码基因组成的四联DNA疫苗具有很高的免疫应答水平和保护效率。

关键词： 结核分枝杆菌 分泌蛋白抗原 四联核酸疫苗 免疫原性 保护效率

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结核分枝杆菌ESAT-6 DNA疫苗的细胞和体液应答及保护效率研究

蔡宏; 田霞; 呼西旦; 李淑霞; 朱玉贤; 《中国预防兽医学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：构建了含分枝杆菌抗原ESAT_6( 6kDa)分泌蛋白 (结构基因 )的真核表达载体pJW43 0 3 ,进行了酶切鉴定和序列分析 ,确定含有正确的读码框。用脂质体介导法将重组表达质粒导入COS7细胞内并瞬时表达 ,收集表达细胞或浓缩上清液 ,进行SDS_PAGE电泳 ,用结核杆菌特异性抗体进行免疫印迹检测 ,证明上述重组质粒能在哺乳动物细胞中表达出特异蛋白。重组表达质粒肌注免疫小鼠 ,首免后 2 1d,未检测到特异性抗体 ,二免和三免 2 1d后ESAT_6的特异性抗体平均效价分别为 1∶40 0和 1∶80 0。三免后 2 1dESAT_6的特异性细胞因子γ_干扰素的浓度为 1 2 .8± 0 .4ng/mL,而阴性对照空载体DNA组三免后只诱导产生 <0 .1ng/mL的γ_干扰素。三免后经静脉强毒攻击 ,免疫组小鼠肺脏的细菌数比对照空载体组减少了 90 %以上。本研究表明 ,该核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞和体液免疫应答并获得较高的保护效率。

关键词： 结核分枝杆菌 ESAT-6分泌蛋白抗原 ESAT-6DNA疫苗 免疫原性 保护

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利用PCR技术检测537份新疆结核病人痰标本中的结核分枝杆菌

蔡宏; 李君莲; 呼西旦; 李淑霞; 黄丽茜; 陈银华; 许苗; 朱玉贤; 《中国人兽共患病杂志 》 2001 北大核心 CSCD

摘要：目的　提高聚合酶链反应在检测人结核分枝杆菌中的特异性和敏感性。方法　在聚合酶链反应中对 4种DNA片段即结核杆菌特异插入序列IS6 110 ,IS10 81,和 16SrRNA ,6 5kDa摸板进行了比较 ;为获取较多的细菌DNA ,临床痰标本处理采用了国际标准化方法主要包括用一定量的N -乙酰 -L半胱胺酸和氢氧化钠处理痰标本 ;改进了RCR混和液的成份即添加了甘油 ,dUTP -尿嘧啶糖基化酶。结果　选择IS6 110作为结核杆菌特异性摸板用于检测细菌DNA ,制备出了 6批人结核杆菌PCR检测试剂盒 ,在对来自新疆结核病研究所的 5 37份痰标本的检测中发现 ,该试剂盒检测的特异性为 6 5 .97% ,敏感性为 93 .5 3 %。结论改良TB -PCR试剂盒显示有较高的敏感性 ,特异性还有待于进一步完善 ,该试剂盒在临床诊断中有一定的价值。

关键词： 结核分枝杆菌 痰标本 聚合酶链式反应 结核杆菌PCR检测试剂盒

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结核分枝杆菌和其它分枝杆菌菌型分析研究进展

蔡宏; 张曼夫; 《国外兽医学(畜禽传染病) 》 1998

关键词： 牛病 结核病 结核分枝杆菌 菌型

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