科研产出
口蹄疫病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达系统的构建
《动物医学进展 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)双层结构病毒样颗粒,选择牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行株BVDV JZ05-1核心蛋白p14的第169~270位氨基酸和FMDV Asia 1/JS/CHA/05结构蛋白VP1的第1~211位氨基酸,两者之间设计柔性肽连接,人工合成p14-柔性肽-VP1融合蛋白编码序列,全基因长990bp。合成基因与枯草芽胞杆菌表达载体p7257-P43连接,构建成表达质粒p7257-P43-P14-VP1。转化枯草芽胞杆菌WB800,经筛选、鉴定,获得表达p14-VP1融合蛋白的枯草芽胞杆菌。该重组表达菌在含有40μg/mL氯霉素的LB中培养后,菌体超声破碎可检测到目的蛋白。Western blot结果显示,该蛋白能特异性识别Asia 1型FMDV抗体,具有良好的反应原性。电镜观察显示,融合蛋白组装为直径约50nm大小的病毒样颗粒(VLP)。
关键词： Asia 1型口蹄疫病毒 病毒样颗粒 融合蛋白 枯草芽胞杆菌
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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及鉴定
《中国人兽共患病学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：目的克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增EgTPx基因,克隆到原核表达载体pET-41b中,转化大肠杆菌BL21,经过IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,通过谷胱甘肽Sepharose4B层析柱分离纯化获得重组蛋白并免疫小鼠,制备抗血清。Western blot鉴定抗血清的特异性,ELISA测定抗体的效价。结果用PCR方法扩增获得的EgTPx基因长度为582bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgTPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为54kDa,鼠抗EgTPx抗体能与融合蛋白和天然原头蚴抗原发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶256000。结论成功地制备了鼠抗EgTPx抗体,并能够特异识别原核表达的融合蛋白EgTPx和天然原头蚴抗原,为研制有效的包虫病疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。
关键词： 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 融合蛋白 抗血清
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