科研产出
绵羊基质Gla蛋白基因克隆、表达谱及其在卵巢组织的定位
《江苏农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在克隆绵羊基质Gla蛋白(MGP)基因的蛋白质编码序列(CDS),制备特异抗体，并检测该基因在绵羊卵巢组织中的表达分布。以卵泡总cDNA为模板，扩增获得绵羊MGP基因CDS区全长序列；合成绵羊MGP蛋白C末端15个氨基酸长度的多肽，免疫小鼠，制备抗血清；利用实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹技术分析其在不同组织和不同大小的卵泡中的表达水平；通过免疫组织化学方法分析其在卵巢组织中的表达分布特征。结果表明，成功获得绵羊MGP基因的CDS区全长片段(467 bp),编码103个氨基酸，理论相对分子量为12 230.96,等电点为9.27;N末端19个氨基酸序列被预测为信号肽序列，成熟肽有84个氨基酸，为外泌性蛋白质，无胞内区；MGP总蛋白质氨基酸序列与山羊、牛的同源蛋白质相似性分别为100.0%、99.0%,与人、小鼠的相似性均为85.4%。MGP mRNA和蛋白质在绵羊心、肝、脾、肺、肾等组织中的相对表达量较低，在卵巢、输卵管、子宫等生殖系统或组织中的相对表达量较高，在黄体中的相对表达量也较高；MGP在卵巢组织颗粒细胞、卵丘细胞中均有表达，但在闭锁卵泡中不表达。本研究结果可为进一步研究MGP在卵巢组织中的生物学功能提供参考。
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阿勒泰羊FKBP5基因的克隆及其在组织中的表达
《西南农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：[目的]研究FKBP5基因和蛋白在绵阿勒泰羊不同组织、不同卵泡发育时期中的表达和定位情况.[方法]利用PCR法扩增获得阿勒泰羊FKBP5基因CDS区全长序列,并构建分子系统进化树;利用Real-time qPCR和Western Blot检测阿勒泰羊卵巢等不同器官和组织中FKBP5基因和蛋白的表达量;利用Real-time qPCR技术检测FKBP5基因在阿勒泰羊不同大小卵泡及黄体中的表达情况;利用免疫组化技术检测FKBP5蛋白在阿勒泰羊卵巢中的表达定位.[结果]阿勒泰羊FKBP5基因CDS区序列全长1390 bp,编码462个氨基酸;绵羊与山羊和牛的亲缘关系较近,与鸡(禽类)亲缘关系较远;FKBP5基因和蛋白在绵羊心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、子宫、卵巢、输卵管和睾丸中均有表达,其中在输卵管中表达量最高,接下来依次是肝脏、脾脏、子宫、卵巢和睾丸等器官和组织,在心脏、肺和肾脏中表达量较低;FKBP5基因在大卵泡中的表达量最高,且极显著高于卵巢、小卵泡和黄体(P<0.01),其次是卵巢和小卵泡,在黄体中表达量最低;FKBP5基因在大、小卵泡不同细胞中的表达情况略有不同.其在大卵泡膜细胞中的表达极显著高于其他各类细胞(P<0.01),而在大卵泡GCs中的表达量也显著高于小卵泡的GCs、膜细胞以及大、小卵泡的卵丘细胞(P<0.05);FKBP5蛋白在阿勒泰羊初级卵泡、次级卵泡、黄体组织和大、小有腔卵泡的卵母细胞、卵丘细胞、颗粒细胞及膜细胞中均有表达.[结论]推测FKBP5基因可能在阿勒泰羊卵泡发育过程中发挥一定作用.
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