蓝舌病新疆分离株VP7蛋白编码基因序列分析及一步法RT-PCR方法的建立

马晓菁; 谷文喜; 叶锋; 刘帅; 刘丽娅; 谢彩云; 钟旗; 易新萍; 《新疆农业科学 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：【目的】分析蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列，建立蓝舌病新疆分离株一步法RT-PCR方法，为新疆BTV分子流行病学调查及防控提供技术支持。【方法】采用二代测序技术获得新疆分离株S7基因序列，登陆GenBank对序列进行同源性Blast比对，用软件MEGA 5.0分析序列差异，根据蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列，运用软件Oligo6.0设计引物，对蓝舌病新疆分离株S7基因进行RT-PCR扩增，并验证该方法的特异性及敏感性。【结果】蓝舌病中国新疆分离株编码VP7蛋白S7基因序列与哈尔滨报道BTV分离株S7基因片段相似度较高为89.64%,与中国云南报道BTV-29型分离株、蒙古国BTV分离株S7基因片段相似度分别为87.49%和87.39%;与德国BTV分离株S7基因片段相似度为80.70%,其余均无同源性序列。中国新疆分离株S7基因片段序列与4条同源序列间存在26处核苷酸差异，9处氨基酸差异。【结论】建立的蓝舌病中国新疆分离株S7基因片段一步法RT-PCR方法具有良好的特异性，仅BTV中国新疆分离株扩增获得目的条带，该方法的敏感性为4.0×10³ copies/mL。

关键词： 蓝舌病 VP7蛋白 RT-PCR