科研产出
新疆荷斯坦牛β防御素5基因的克隆、表达及表达产物的抑菌活性
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆和表达新疆荷斯坦牛中性粒细胞防御素5(BNBD5)基因,对BNBD5蛋白进行纯化并分析其抗菌活性。【方法】利用RT-PCR方法扩增新疆荷斯坦奶牛BNBD5的cDNA序列,将BNBD5 cDNA克隆到原核表达载体pGEX-4T-2,测序分析后转化大肠埃希菌BL21(DE3)。经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析;利用GST亲和柱纯化BNBD5蛋白,并进行体外抑菌试验。【结果】通过PCR扩增获得了218bp的牛BNBD5全长cDNA序列,经IPTG诱导,获得了约33 ku的牛BNBD5蛋白。牛BNBD5蛋白在15~25℃培养时的可溶性较37℃时多,且大多以包涵体形式存在,经纯化后最终获得了少量的目的蛋白。纯化的BNBD5蛋白对标准金黄色葡萄球菌和标准大肠埃希菌均具有明显的抑菌活性。【结论】克隆、表达了牛BNBD5基因,表达的BNBD5蛋白对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌都有抑菌活性。
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拒盐型盐生植物小花碱茅肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析
《基因组学与应用生物学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：本研究根据其它植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以拒盐型盐生植物小花碱茅根部总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并克隆到PUCm-T载体,阳性克隆经PCR检测后进行测序,在GenBank中注册;序列分析结果表明:该片段长约600bp,编码198个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的其它植物Actin基因序列同源性均在84%以上,与其它肌动蛋白的氨基酸序列同源性达94%以上。
新城疫病毒分离株F基因的克隆与序列分析
《动物医学进展 》 2009 北大核心
摘要：应用RT-PCR分别扩增出新城疫病毒(NDV)青海株(QH3)、黑龙江株(HLJ)和甘肃株(A4)的融合蛋白(F)基因的全长核苷酸,再克隆到pMD18-T载体中。经酶切和质粒PCR鉴定,获得阳性重组质粒后,进行序列测定并推导出其氨基酸序列,同时进行分析和比较。序列分析结果表明,所获得的3个分离株F基因完整的开放阅读框长度为1662bp,共编码F蛋白的553个氨基酸;3个毒株之间的核苷酸序列同源性为88.0%～90.6%;与常用疫苗株之间核苷酸序列同源性只有85.3%～91.6%。三者F基因的裂解位点均为112R-R-Q-K/R-R-F117,符合强毒株裂解区氨基酸组成的特征。以1bp～374bp的核苷酸序列绘制系统发育树分析表明,QH3株NDV为基因Ⅷ型,A4株NDV为基因Ⅵ型,HLJ株NDV为基因Ⅸ型。
鹅源H5N1亚型禽流感病毒新疆株HA基因的克隆和序列分析
《全国人畜共患病学术研讨会论文集 》 2006 CSCD
摘要：根据已发表的H5N1亚型禽流感病毒的血凝素(HA)基因序列,设计并合成了1对引物,利用RT-PCR方法扩增出鹅源H5N1亚型禽流感病毒新疆株A/Goose/XJYL/10/2003(H5N1)HA基因,然后将其克隆到pMD18-T载体上,获得了全长为1758bp的HA全基因序列,其氨基酸切割位点附近具有碱性氨基酸插入,具备了高致病性禽流感病毒的特征。利用DNA分析软件,与GenBank中已发表的同一亚型禽流感病毒HA基因的参考进行比较分析表明,本试验株与香港、广东、广西、浙江等南方地区2000-2004年间的H5N1禽流感毒株HA基因核甘酸序列同源性在98.0%-98.7%之间,的H5N1禽流...
H5N1亚型禽流感病毒新疆株NS基因的克隆和序列分析
《中国兽医科技 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：根据已发表的H5N1禽流感病毒NS基因全序列设计了1对引物,对4株禽流感病毒新疆株的NS基因进行了RT-PCR扩增,并将其克隆到pMD 18-T载体上,分别获得了全长为817、851、8548、54 bp的全基因序列。序列分析结果表明,新疆毒株间的核苷酸同源性为97.8%~98.9%,氨基酸同源性为96.5%~98.7%,与广东、香港和东南亚等不同地区的11个毒株比较,同源性为90.0%~99.4%;与来自野禽、猪等不同种类的11个流感毒株比较,同源性为81.4%~99.3%。系统进化树分析表明,新疆株独立分支。
