文献类型： 中文期刊

作者： 加尔肯 ¹ ; 库来汗·巴依多拉 ² ; 冉多良 ¹ ; 艾海提·亚森 ¹ ; 布力布力汗 ³ ; 刘建华 ¹ ;

作者机构： 1.新疆农业大学动物医学学院

2.新疆兽药饲料监察所

3.新疆维吾尔自治区畜牧科学院

关键词： EHV-1;ORF30基因;原核表达;载体

期刊名称： 草食家畜

ISSN： 1003-6377

年卷期： 2019 年 004 期

页码： 25-29

摘要： 马疱疹病毒1型(Equid herpesvirus 1,EHV-1)是引起孕马流产的主要病原体之一,也与死胎、新生幼驹死亡、 青年马鼻肺炎以及一种名为马疱疹病毒性脑脊髓病(Equine herpesvirus myeloencephalopathy,EHM)的神经系统疾病有关.近些年来,EHM出现的频率越来越高,对养马业和赛马业的危害很大.最新研究结果显示,神经致病性毒株与编码病毒DNA聚合酶催化亚基的ORF30基因单核苷酸点突变有着很高的相关性.为了获得马疱疹病毒1型DNA聚合酶,并制备DNA聚合酶的多克隆抗体,本研究以EHV-1-XJ2015毒株基因组DNA为模板,扩增ORF30基因编码区,并连接于pMD19-T载体上,用BamHI和HindIII双酶切后,将酶切产物插入表达pET-28a(+)中,转化入大肠杆菌DH5感受态细胞,构建ORF30基因的原核表达载体pET-28a(+)-ORF30.通过酶切、PCR扩增和测序等方法对阳性重组质粒进行了鉴定.结果表明,构建的重组质粒pET-28a(+)-ORF30经BamhⅠ和HindⅢ双酶切后,经1%琼脂糖凝胶电泳,电泳结果与预期相符,表明目的片段成功插入载体pET28a(+)中.通过采用特异性引物对重组质粒pET28a(+)-ORF30进行PCR鉴定,产物经1%琼脂糖凝胶电泳观察,得到一条大小约1074bp的清晰条带,与目的基因大小相符,表明重组质粒pET28a(+)-ORF30构建成功.本研究为进一步探讨马疱疹病毒1型ORF30基因遗传变异对DNA聚合酶功能的影响奠定了基础.