文献类型： 中文期刊
作者： 吴建勇 1 ; 王登峰 1 ; 杨学云 1 ; 李建军 1 ; 王治才 1 ;
作者机构： 1.新疆畜牧科学院兽医研究所
关键词： 铜绿假单胞菌;外毒素A;克隆;表达
期刊名称： 草食家畜
ISSN： 1003-6377
年卷期： 2013 年 02 期
页码： 64-68
摘要： 为建立铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A(Exotoxin A,ETA)的原核表达方法,采用PCR技术扩eta基因,将其插入pET-28a载体构建重组质粒pET-28a-eta,并对重组质粒进行双酶切、PCR及测序鉴定。转入BL21(DE3)中诱导表达,检测目的蛋白大小及反应原性,然后进行表达条件的优化及其表达形式检测。结果表明,所扩增eta基因大小为1917 bp,与GeneBank参比序列一致性在98.70%;蛋白分析表明,rETA大小为74 KDa,具有和天然毒素相似的反应原性。目的基因在37℃、0.6 mmol/LIPTG诱导3 h获得最佳表达。该蛋白在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但主要以包涵体为主。该研究为进一步开展ETA的批量纯化提供了前提条件。
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