文献类型： 中文期刊

作者： 王立霞 ¹ ; 孟庆玲 ² ; 乔军 ² ; 郭晶 ² ; 伍晔晖 ² ; 才学鹏 ³ ; 蔡扩军 ⁴ ; 王登峰 ⁵ ;

作者机构： 1.石河子大学动物科技学院

2.石河子大学科技学院

3.中国农业科学院兰州兽医研究所

4.乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心

5.新疆维吾尔自治区畜牧科学院兽医研究所

关键词： 单核细胞增生李斯特菌;内化素Lmo0549;克隆;分子特征;原核表达

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2019 年 018 期

页码： 199-203

收录情况： 北大核心

摘要： 应用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)新型内化素lmo0549基因进行克隆和测序,并对其进行生物信息学分析;通过扩增获得Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区序列,并将其亚克隆至pET-32a(+)表达载体,转入大肠杆菌中用异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,简称IPTG)诱导表达,应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定重组蛋白的表达形式及其抗原特异性.序列分析结果表明,扩增得到的lmo0549基因全长为2 034 bp,编码677个氨基酸,其信号肽序列是前23个氨基酸,在Lmo0549蛋白氨基酸序列中,从N端到C端分别包括5个富含亮氨酸的重复基序(LRR)、1段PKD重复序列和1个WxL结构域;同时还存在N-联糖基化位点10个、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点14个、蛋白激酶C磷酸化位点15个.同源性分析显示,LM-SB5 lmo0549基因编码的蛋白氨基酸序列与标准株李斯特菌EGD-e,(NC003210.1)蛋白氨基酸序列的同源性为88.04%,且在单核细胞增生李斯特菌中具有较高的保守性.SDS-PAGE分析显示,表达的Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区具有与理论值33.8 ku相符的分子质量;蛋白质印迹法分析表明,重组蛋白Lmo0549与LM阳性血清可发生特异性免疫反应,为进一步探讨Lmo0549在LM侵入宿主细胞的分子作用机制奠定了前期基础.