文献类型： 中文期刊

作者： 宋雪 ¹ ; 赵格 ² ; 王娟 ² ; 黄秀梅 ² ; 盖文燕 ² ; 赵建梅 ² ; 曲志娜 ² ; 李月华 ² ; 张林波 ² ; 王君玮 ³ ;

作者机构： 1.中国动物卫生与流行病学中心农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(青岛);吉林农业大学生命科学学院

2.;中国动物卫生与流行病学中心农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(青岛);吉林农业大学生命科学学院

3.;中国动物卫生与流行病学中心农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(青岛);吉林农业大学生命科学学院;

关键词： 多重直接PCR;猪肉;食源性致病菌

期刊名称： 中国人兽共患病学报

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2017 年 08 期

页码： 710-715

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的建立检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌和小肠耶尔森氏菌5种致病菌的多重直接PCR方法。方法根据大肠杆菌phoA、沙门氏菌invA、金黄色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小肠耶尔森氏菌ail的基因序列,设计多重直接PCR引物,建立并优化多重直接PCR反应条件,检测引物的扩增特异性和灵敏性,并将所建立的方法应用于实际采集猪肉样本的检测,与金标培养法相比较,计算多重直接PCR检测法的敏感性、准确性以及阳性预测值。结果所设计的多重直接PCR引物对5种菌都有特异扩增,最低检出限量大肠杆菌为10CFU,金黄色葡萄球菌敏感性为100CFU,沙门氏菌、李斯特菌、小肠耶尔森氏菌敏感性可达1CFU。60份猪肉样本中检出大肠杆菌15份、沙门氏菌6份、金黄色葡萄球菌21份、李斯特菌20份、小肠耶尔森氏菌35份,阳性检出率均高于金标培养法,总体检测敏感性为100%,准确性为94%,阳性预测值为81.44%。结论多重直接PCR法实现了同时对各食源性致病菌敏感特异的检测,并且省去了提取模板的步骤,将检测时间缩短至3h左右,便于食品安全风险监测中常见食源性致病菌的通量检测。