科研产出
绵羊白细胞内的慢病毒cDNA gag基因的PCR检测
《畜牧兽医科学(电子版) 》 2018
摘要：在对绵羊白细胞中的慢病毒Cdna gag基因进行检验时,通过PCG检测技术的应用还能够起到良好的检测效果,对于该病毒的防治以及促进我国养殖业的发展也有着一定的积极意义.
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7个shRNA分子对绵羊BMPR-1B基因的干扰作用分析
《江苏农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为获得有效干扰绵羊BMPR-1B基因的shRNA干扰分子,从绵羊卵巢组织中扩增了1 515 bp BMPR-1B基因全长编码区cDNA序列,添加HA标签序列后,插入Plex-mcs慢病毒质粒,构建Plex-BMPR-1B慢病毒表达载体,转染HEK293细胞,并与2个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,用获得的重组慢病毒感染HEK293细胞;同时,将7个干扰分子与Pll-LentiLox 3.7载体重组,并与3个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,获得干扰分子的重组病毒颗粒。最后用干扰分子重组的病毒颗粒感染整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞,进行qRT-PCR和Western blot检测。结果显示:重组BMPR-1B蛋白质在稳定整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞系中获得了表达;研究中设计的7个shRNA分子能抑制绵羊BMPR-1B基因表达水平68.30%～99.86%,其中PLL-BMPR-1B-1306和PLL-BMPR-1B-1475干扰分子的干扰效果最好。
关键词： BMPR-1B基因 shRNA HEK293细胞 慢病毒
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绵羊MSTN基因慢病毒表达载体的构建及其对成肌细胞的分化作用
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】构建新疆细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,研究其在细毛羊成肌细胞分化中的作用,并探讨其作用机制。【方法】采用RT-PCR技术,扩增MSTN编码区序列,克隆入plex-mcs慢病毒表达载体,构建plex-MSTN慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定。将plex-MSTN包装成plex-MSTN慢病毒。用酶消化法分离培养新疆细毛羊成肌细胞,慢病毒感染制备MSTN过表达成肌细胞系,通过马血清诱导分化,Western blotting检测分化细胞MSTN基因的表达,免疫荧光分析分化肌管的融合率及肌管直径,Realtime RT-PCR检测分化相关基因的表达。【结果】克隆的新疆细毛羊MSTN基因编码区全长序列(1 128bp)与NCBI上公布的序列99.9%同源,仅在外显子2上存在单碱基突变;Western blotting检测结果显示,MSTN过表达成肌细胞过表达MSTN蛋白;免疫荧光检测表明,MSTN过表达成肌细胞的肌管融合率与肌管直径分别为5.69%和12.35μm,显著低于非转化成肌细胞(10.21%和18.5μm)(P<0.05);Re-altime RT-PCR结果显示,MSTN过表达成肌细胞中的Myogenin、p21、MyoD基因表达显著下调,Smad3基因表达极显著上调(P<0.01)。【结论】成功构建了细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,MSTN基因对细毛羊成肌细胞的分化具有显著的抑制作用,确定了MSTN基因与Myogenin、p21、MyoD及Smad3基因在成肌细胞分化过程中的调控关系。
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绵羊Follistatin基因表达及其结构域的功能分析
《生物工程学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：为研究羊Follistatin基因的功能,提取了绵羊卵巢总RNA,通过RT-PCR方法获得羊FollistatincDNA的完整开放阅读框(1038bp)。去除信号肽序列后与原核表达载体pET41a连接,构建重组表达质粒pFSsig-,经大肠杆菌诱导表达获得FSsig-蛋白(66kDa)。通过RT-PCR克隆了包含N端和结构域1的Follistatin突变体(FSN+D1),将FSN+D1片段插入慢病毒载体(pLEX-MCS)构建了pFS-N+D1慢病毒重组表达质粒。在293T细胞中进行慢病毒的包装,再感染绵羊肌肉原代细胞,得到稳定表达FSN+D1的肌肉细胞系,通过细胞生长曲线结果显示稳定表达FSN+D1的肌肉细胞明显比正常肌肉细胞增殖快,且差异极显著(P<0.01),表明绵羊FSN+D1结构域有促进肌肉细胞生长的功能。
关键词： 绵羊Follistatin基因 原核表达 慢病毒 细胞生长曲线
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绵羊进行性肺炎病原检测方法研究进展
《动物医学进展 》 2007
摘要：绵羊进行性肺炎是由反转录病毒慢病毒亚科中的绵羊慢病毒引起的一种慢性进行性传染病。目前,这种传染病的病原检测方法主要包括病毒分离培养、免疫扩散、ELISA和免疫印迹、PCR等。文章就绵羊进行性肺炎病原各种检测方法的研究做一综述。
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用聚合酶链反应检测山羊关节炎—脑炎及梅迪—维斯纳病毒
《中国动物检疫 》 1996
摘要：以CAEV的POL及MVV的GAG基因为模板，用聚合酶链反应（PCR）检测国内外不同毒株的细胞感染物。以POL为模板的PCR可检出所有CAE及MV病毒。以GAG为靶基因的PCR便检出一株MV病毒，但所有CAEV均呈阳性反应。同属侵病毒科的马传染性贫血病毒（EIAV）对两级引物的PCR均呈阴性反应。
关键词： 聚合酶键反应 山羊关节炎—脑炎病毒 梅迪—维斯纳病毒 慢病毒
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