科研产出
靶向O型口蹄疫病毒shRNA转基因猪体细胞抗病毒活性研究
《中国预防兽医学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为研究靶向O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因shRNA转基因猪体细胞的抗病毒活性,本实验在成功培育转基因克隆猪的基础上,通过分离与培养转基因猪体细胞,对其shRNA进行PCR和Southern blot检测,并将FMDV感染体细胞中,通过细胞病变(CPE)、间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析转基因猪体细胞抗FMDV活性。结果表明,转基因猪体细胞基因组DNA中携带有靶向FMDV VP1基因的shRNA基因片段。与非转基因猪体细胞相比,接种FMDV转基因猪体细胞其出现CPE的时间延迟,细胞内病毒含量显著降低,细胞感染病毒36 h时,对细胞中FMDV VP1基因抑制效率为53.6%。表明该靶向FMDV shRNA转基因克隆猪体细胞在体外具有良好的抗病毒活性。本研究为进一步在体内评价转基因动物的抗病毒活性奠定了基础。
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7个shRNA分子对绵羊BMPR-1B基因的干扰作用分析
《江苏农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为获得有效干扰绵羊BMPR-1B基因的shRNA干扰分子,从绵羊卵巢组织中扩增了1 515 bp BMPR-1B基因全长编码区cDNA序列,添加HA标签序列后,插入Plex-mcs慢病毒质粒,构建Plex-BMPR-1B慢病毒表达载体,转染HEK293细胞,并与2个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,用获得的重组慢病毒感染HEK293细胞;同时,将7个干扰分子与Pll-LentiLox 3.7载体重组,并与3个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,获得干扰分子的重组病毒颗粒。最后用干扰分子重组的病毒颗粒感染整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞,进行qRT-PCR和Western blot检测。结果显示:重组BMPR-1B蛋白质在稳定整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞系中获得了表达;研究中设计的7个shRNA分子能抑制绵羊BMPR-1B基因表达水平68.30%～99.86%,其中PLL-BMPR-1B-1306和PLL-BMPR-1B-1475干扰分子的干扰效果最好。
关键词： BMPR-1B基因 shRNA HEK293细胞 慢病毒
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针对Oct-4和Survivin基因的双靶向shRNA腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞的抑制作用
《生物工程学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：转录因子Oct-4和Survivin是细胞增殖的关键调控因子,构建针对Oct-4和Survivin基因的双靶向shRNA腺病毒载体Ad5-Dual-shRNA,并研究其对肝癌细胞及移植瘤的生长抑制作用。合成Oct-4和Survivin基因的shRNA序列,插入腺病毒穿梭载体pDC312,含有shRNA的穿梭载体与腺病毒骨架载体pBHGloxdeltaE13Cre共转染HEK293细胞,经Cre/LoxP位点特异性重组获得重组腺病毒Ad5-Dual-shRNA;腺病毒Ad5-Dual-shRNA感染肝癌细胞系EHBH-H1,经Western blotting检测Oct-4和Survivin基因的表达情况,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐染色法(MTT实验)和裸鼠荷瘤实验检测对肿瘤细胞生长的影响。研究结果显示,双靶向重组腺病毒Ad5-Dual-shRNA感染肝癌细胞系EHBH-H1能够有效沉默Oct-4与Survivin基因的表达,并且在MTT实验和裸鼠荷瘤试验中都显示出较单一靶向的shRNA腺病毒载体Ad5-Surv-shRNA、Ad5-Oct4-shRNA具有更为明显的肿瘤细胞生长抑制作用。实验结果表明,特异性双靶向shRNA腺病毒载体Ad5-Dual-shRNA是一种更为高效的靶向肿瘤基因治疗载体。
关键词： Oct-4 Survivin shRNA 肝癌 腺病毒
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