科研产出
蓝舌病新疆分离株VP7蛋白编码基因序列分析及一步法RT-PCR方法的建立
《新疆农业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】分析蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列，建立蓝舌病新疆分离株一步法RT-PCR方法，为新疆BTV分子流行病学调查及防控提供技术支持。【方法】采用二代测序技术获得新疆分离株S7基因序列，登陆GenBank对序列进行同源性Blast比对，用软件MEGA 5.0分析序列差异，根据蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列，运用软件Oligo6.0设计引物，对蓝舌病新疆分离株S7基因进行RT-PCR扩增，并验证该方法的特异性及敏感性。【结果】蓝舌病中国新疆分离株编码VP7蛋白S7基因序列与哈尔滨报道BTV分离株S7基因片段相似度较高为89.64%,与中国云南报道BTV-29型分离株、蒙古国BTV分离株S7基因片段相似度分别为87.49%和87.39%;与德国BTV分离株S7基因片段相似度为80.70%,其余均无同源性序列。中国新疆分离株S7基因片段序列与4条同源序列间存在26处核苷酸差异，9处氨基酸差异。【结论】建立的蓝舌病中国新疆分离株S7基因片段一步法RT-PCR方法具有良好的特异性，仅BTV中国新疆分离株扩增获得目的条带，该方法的敏感性为4.0×103 copies/mL。
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不同毛色巴什拜羊皮肤组织中10个候选基因表达水平分析
《中国草食动物科学 》 2024 北大核心
摘要：为探讨可能影响动物毛色的10个候选基因（TCF25、TYR、TYRP1、ASIP、KIT、MITF、EDNRB、SLC7A11、MC1R和DCT）与巴什拜羊毛色的关系，利用实时荧光定量PCR技术对30只1周岁不同毛色（棕色、白色和黑色各10只）被毛的巴什拜羊皮肤组织中与毛色相关基因的mRNA表达量进行了研究，所有数据使用SPSS 23.0进行单因素方差分析。结果显示，在不同毛色被毛巴什拜羊皮肤中，TCF25、ASIP和EDNRB基因在白色被毛皮肤中的表达量均显著高于黑色和棕色被毛皮肤（P ＜0.05）;TYR、TYRP1、DCT和MC1R基因在黑色被毛皮肤中的表达量均显著高于白色和棕色被毛皮肤（P ＜0.05）;MITF基因在棕色被毛皮肤中的表达量显著高于白色和黑色被毛皮肤（P ＜0.05），而KIT和SLC7A11基因在不同毛色皮肤组织中均无显著差异（P＞ 0.05）。综上可知，TCF25和ASIP基因主要与巴什拜羊白色被毛性状相关，TYR、TYRP1、DCT和MC1R主要与巴什拜羊黑色被毛性状相关，而MITF和EDNRB基因参与调控巴什拜羊棕色和白色被毛性状的具体作用机制还有待进一步探究。
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鉴别蓝舌病病毒血清29型RT-PCR与qRT-PCR方法的建立与应用
《中国兽医科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为建立快速鉴别蓝舌病病毒血清29型(BTV-29)的方法,根据BTV-29型毒株基因节段2(Seg-2)的序列特征,分别设计用于RT-PCR与q RT-PCR方法的特异性引物与Taq Man探针,通过试验确定其敏感性,用BTV-1～BTV-24等核酸作为对照评价其特异性。对BTV-29感染动物血液样本中的病毒核酸进行监测,并用BTV群特异q RT-PCR方法验证其可靠性。结果显示,建立的BTV-29特异RT-PCR的灵敏度是1.12×10~2 copies/μL,而BTV-29特异q RT-PCR的灵敏度是1.12×10~1 copies/μL,均与BTV-1～BTV-24、流行性出血病病毒、帕利亚姆病毒和阿卡斑病毒之间无交叉反应;用BTV-29特异q RT-PCR检测BTV-29型感染山羊血液中的BTV-29核酸的动态变化,结果与BTV群特异q RT-PCR检测结果基本一致。本研究建立的BTV-29特异RT-PCR和q RT-PCR方法均具有良好的特异性和较高的灵敏度,能快速鉴别BTV-29,为BTV-29的致病性、诊断与流行病学研究提供了技术保障。
关键词： 蓝舌病病毒 BTV血清29型 血清型鉴定 qRT-PCR RT-PCR
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新疆某地区犬流感病毒血清学及病原学调查
《塔里木大学学报 》 2021
摘要：为了解新疆某地区流浪犬和宠物犬群体中犬流感现状,应用ELISA方法和RT-PCR方法,分别对2019年1月至9月期间收集的流浪犬和宠物犬共计250份血清样本和179份鼻拭子样本进行血清学和病原学检测。检测结果显示:血清学检测流浪犬和宠物犬流感抗体阳性率分别是58%（58/100）和5.33%（8/150）;病原学检测流浪犬和宠物犬流感病毒抗原阳性率分别是4%（4/100）和1.27%（1/79）,RT-PCR产物测序序列经BLASTn比对与犬流感H3N2亚型同源性最高。血清学结果显示调查地区一定比例的流浪犬和宠物犬曾感染犬流感;病原学结果显示调查地区流行H3N2亚型犬流感。犬流感病毒血清学及病原学调查可为公共卫生安全评估提供参考。
关键词： 犬流感病毒 血清学 病原学 ELISA RT-PCR
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Hoxc13基因在苏博美利奴羊胎羔生长发育期不同组织中的表达分析
《新疆农业科学 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：【目的】分析苏博美利奴羊不同组织中Hoxc13基因mRNA的表达量差异,为分子标记辅助育种以及,研究细毛羊主要经济性状,奠定理论基础。【方法】使用RT-PCR技术检测Hoxc13基因在苏博美利奴羊65和135 d皮肤、肌肉和不同内脏组织(心脏、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏)中mRNA的表达量,并采用相对定量法对其表达量进行统计分析。【结果】在苏博美利奴羊皮肤、肌肉和不同内脏组织中均有Hoxc13基因的表达,并且在皮肤中的表达量显著高于其它组织(P<0.05),毛囊的形成和毛发生长与Hoxc13基因密切相关。【结论】建立了胎龄分别在65和135 d的苏博美利奴羊,其不同组织中适于定量检测的Hoxc13基因表达量的RT-PCR方法,从分子水平探讨了苏博美利奴羊的组织器官与Hoxc13基因表达之间的内在联系。
关键词： 苏博美利奴羊 RT-PCR 组织 Hoxc13基因
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苏博美利奴羊毛囊发育不同时期皮肤组织LncRNAs及其靶基因的差异表达
《农业生物技术学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：长链非编码RNA (long noncoding RNA, LncRNA)参与哺乳动物多种生物学过程,目前研究其在毛囊形成过程中的作用机制却相对较少,因此研究LncRNA对毛囊发育的影响成为了解毛囊形成生物学过程的新方向。为验证前期获得的苏博美利奴羊(Ovis aries)毛囊发育不同时期皮肤组织的RNA-Seq结果以及与预测靶基因表达量差异,本研究利用qRT-PCR技术检测了在苏博美利奴羊毛囊发育6个关键时期两种在皮肤组织中差异表达且靶基因与毛囊发育相关的LncRNA 00202353和LncRNA 00316173及其靶基因的表达情况。结果表明,LncRNA 00202353及其靶基因分泌型卷曲相关蛋白2 (secreted frizzledrelated protein 2, SFRP2)的表达量在胚胎期85 d极显著高于胚胎期65 d、胚胎期135 d、出生后7 d和出生后30 d的表达量(P<0.01);LncRNA 00316173及其靶基因胰岛素样生长因子2 (insulin-like growth factor2, IGF2)的表达量在胚胎期65 d时极显著高于胚胎期135 d、出生后7 d和出生后30 d的表达量(P<0.01);将苏博美利奴羊毛囊发育时期分为发育期和成熟期进行分析,发现LncRNA 00202353及其靶基因SFRP2与LncRNA 00316173及其靶基因IGF2的表达量在毛囊发育期极显著高于毛囊成熟期(P<0.01),研究表明LncRNA 00202353与LncRNA 00316173及其靶基因参与毛囊的发育过程。本研究结果对后期深入研究LncRNA对毛囊发育的研究具有重要的参考价值,也为探究超细毛羊毛囊周期性变化的生物学过程提供研究线索。
关键词： 苏博美利奴羊 毛囊发育 长链非编码RNA(LncRNA) qRT-PCR
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2016年新疆尉犁县羊蓝舌病的诊断
《草食家畜 》 2018
摘要：为监测新疆地区自然环境中蓝舌病流行情况,并分离蓝舌病病毒(BTV),本研究在新疆巴州尉犁县设置10只山羊、10只绵羊为哨兵动物,自2016年5月-11月期间每周采集哨兵动物的血清和抗凝血,对所有样品进行BTV抗体检测,并将阳性及转阳前、后一周的抗凝血样本接种于BHK-21细胞,盲传5代后有14份细胞出现病变,对这些病变细胞液进行Ac-ELISA检测、BTV VP7基因PCR鉴定。结果显示BTV抗原检测均为阳性,经RT-PCR扩增,在1 156 bp处均获得目的基因片段。本研究在新疆成功分离到了羊源BTV。
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苏博美利奴羊S100A11基因序列分析及表达研究
《黑龙江畜牧兽医 》 2016 北大核心
摘要：为了探讨S100A11基因在苏博美利奴羊中不同类型细度的细毛羊中的表达模式,试验以苏博美利奴羊为研究对象,克隆了钙囊素S100A11基因,采用生物信息学方法进行遗传进化分析,对S100A11蛋白的理化性质进行分析,并对其二级蛋白结构进行预测,且通过RT-PCR相对定量方法检测S100A11基因在不同绵羊个体中的表达规律。结果表明:绵羊S100A11基因的CDS全长序列为866 bp,编码了105个氨基酸,与绵羊、山羊、牛、猪、鼠、兔、鸡、狗和斑马鱼的CDS同源性分别为96%、96%、96%、87%、24%、44%、70%、70%、60%;分别在1 bp、220~336 bp、415~864 bp有3个开放式阅读框(ORF);S100A11基因全长为4 798 bp。S100A11蛋白含有1个信号肽、19个磷酸化位点;同时S100A11基因在超细型细毛羊皮肤组织表达量极显著高于细型细毛羊的表达量(P<0.01),差异倍数为2.048。
关键词： 绵羊 S100A11基因 生物信息学 RT-PCR 显著性表达
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新疆蓝舌病病毒的分离及初步鉴定
《中国兽医学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：针对新疆蓝舌病流行现状,本试验以蓝舌病血清学检测为阴性的动物建立监控群,于2014年5月至9月每周采集1次血样,血清学检测出现转阳动物后,取其转阳前后2周血样,接种10日龄鸡胚,收获死亡鸡胚肝脏,研磨浸毒后接种C6/36细胞和BHK-21细胞,出现细胞病变(cytopathic effect,CPE)样本进行PCR鉴定和电镜观察,并用细胞微量中和试验进行血清定型。经RT-PCR扩增蓝舌病血清型群特异VP7片段和NS1片段,鉴定在1 156,272,101bp处有特异性条带。电镜观察到疑似的病毒颗粒,中和试验结果显示该毒株为BTV-1型。上述结果显示,本研究分离到蓝舌病病毒1株,中和试验定型为BTV-1型。
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不同羊毛纤维直径细毛羊MYL6基因克隆及差异表达研究
《中国畜牧杂志 》 2016 北大核心
摘要：试验以苏博美利奴羊为研究对象,探讨肌球蛋白轻链6(MYL6)基因在不同羊毛纤维直径的苏博美利奴羊中的表达模式。通过克隆肌球蛋白轻链6(MYL6)基因,结合生物信息学方法对其进行遗传进化和理化性质分析,且预测其二级蛋白结构,又通过RT-PCR相对定量方法以2~(-△△ct)值检测MYL6基因在苏博美利奴羊上的表达规律。结果表明:苏博美利奴羊MYL6基因大小为152036915 bp,MYL6基因的CDS全长序列为696 bp,共编码了105个氨基酸,与绵羊、山羊、牛、猪、老鼠、兔子、鸡、狗和斑马鱼的CDS同源分别为96%、95%、40%、40%、40%、40%、0%、60%、0%。分别在1、220~336、415~864 bp位点上有3个开放式阅读框(ORF)。遗传理化性质研究显示MYL6蛋白含有1个信号肽,在苏氨酸上有5个磷酸化位点、6个N-糖基化位点和3个O-糖基化位点,可能是一种非分泌性蛋白;MYL6蛋白的二级结构以无规则卷曲为主,β-折叠区域占-2.00%;扭曲度占-0.16%;等电荷在-1.60~0.05。研究结果表明,苏博美利奴羊MYL6基因在超细型细毛羊皮肤组织表达量显著高于细型细毛羊的表达量(P<0.01,差异倍数为2.048)。本研究将为开展肌球蛋白轻链基因在细毛羊皮肤转录水平上的研究提供数据理论基础。
关键词： 苏博美利奴羊 MYL6基因 生物信息学 RT-PCR 转录水平
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