科研产出
细粒棘球绦虫免疫相关抗原基因的筛选及原核表达
《黑龙江畜牧兽医 》 2016 北大核心
摘要：为了筛选获得细粒棘球绦虫的免疫相关抗原基因,试验采用SEREX技术对细粒棘球绦虫cDNA文库进行相关抗原筛选,并对获得的细粒棘球绦虫特异性基因进行原核表达与鉴定。结果表明:共获得149个阳性噬菌斑,对其进行PCR扩增和序列分析得到与棘球绦虫属相关的基因序列10个,其中有864 bp的开放性阅读框序列;编码288个氨基酸;经NCBI BLAST氨基酸同源性分析,与多房棘球绦虫诊断抗原gp50的氨基酸序列的同源性为92%,是一个未知的新基因,命名为Ediag A864;经原核表达得到大小约为51 ku的重组蛋白,经Western-blot分析具有良好的反应原性。
关键词： 细粒棘球绦虫 cDNA文库 基因筛选 原核表达 免疫相关 同源性分析
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新吉细毛羊皮肤组织均一化全长cDNA文库的质量评价
《新疆农业大学学报 》 2013 北大核心
摘要：通过对已构建新吉细毛羊皮肤组织的均一化全长cDNA文库进行活化,在此基础上进行EST生物信息学分析研究,期望能发现影响细毛羊羊毛性状的主效基因或相关基因。运用菌落PCR、菌液PCR、质粒快速鉴定3种方法对cDNA文库进行评价,通过测序,在NCBI上BLASTn搜索、比对及运用DNAstar等软件进行分析。初步鉴定的结果:cDNA文库的库容量(滴度)为1.57×106 pfu/mL,菌落PCR、菌液PCR阳性克隆的小片段率在80%~90%,克隆的片段大小在0.6~2.0kb,cDNA在300~500bp,而质粒快速鉴定的在90%,克隆的片段载体带大小3.5~5.0kb。质粒快速鉴定的效果好于其他两种方法,耗时相对短,同时小片段率高;cDNA文库保存完好,符合基因文库的质量要求,有足够大的库容量来保证筛选目的基因。通过对筛选的阳性克隆5’端随机测序,随后获得可读序列169条,经过相关生物信息查询之后,发现其中可能含有完整基因。
关键词： 新吉细毛羊 cDNA文库 质量评价 ESTs序列分析
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利用SMART技术构建新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA文库
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探寻控制羊毛性状的相关基因,构建了新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA文库。【方法】采用Clontech公司的CreaterTM SMARTTM cDNA library construction kit,用Biozol试剂提取新吉细毛羊皮肤组织总RNA后,以反转录酶SuperscriptTMⅡ反转录为第一链cDNA,然后通过LD-PCR合成并扩增ds cDNA,扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、过CHROMA SPIN-400柱去除小片段后,连接到SfiⅠ消化过的pDNR-LIB(带有SfiⅠA和B 2个位点)质粒载体中,最后用热击转化法将重组质粒转化到E.coliDH5α内,得到新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA原始文库,扩增后的文库分装后用50 mL离心管保存。【结果】构建的cDNA文库约含4.2×105个独立克隆,重组效率为100%,插入片段多为0.5~3.0 kb,平均插入片段长度为1.3 kb,符合建库要求。【结论】经检测所构建的文库库容量满足基因筛选要求,可用于特异表达基因全长序列。
关键词： 新吉细毛羊 皮肤组织 cDNA文库 SMART技术
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