科研产出
苏博美利奴羊S1OOA11基因序列分析及表达研究
《黑龙江畜牧兽医(上半月) 》 2016 北大核心
摘要：为了探讨S100A11基因在苏博美利奴羊中不同类型细度的细毛羊中的表达模式,试验以苏博美利奴羊为研究对象,克隆了钙囊素S100A11基因,采用生物信息学方法进行遗传进化分析,对S100A11蛋白的理化性质进行分析,并对其二级蛋白结构进行预测,且通过RT-PCR相对定量方法检测S100A11基因在不同绵羊个体中的表达规律.结果表明:绵羊S100A11基因的CDS全长序列为866 bp,编码了105个氨基酸,与绵羊、山羊、牛、猪、鼠、兔、鸡、狗和斑马鱼的CDS同源性分别为96%、96%、96%、87%、24%、44%、70%、70%、60%;分别在1 bp、220 ~336 bp、415 ~864bp有3个开放式阅读框(ORF);S100A11基因全长为4 798 bp.S100A11蛋白含有1个信号肽、19个磷酸化位点;同时S100A11基因在超细型细毛羊皮肤组织表达量极显著高于细型细毛羊的表达量(P<0.01),差异倍数为2.048.
关键词： 绵羊 S100A11基因 生物信息学 RT-PCR 显著性表达
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新吉细毛羊角蛋白的EST筛选及表达研究
《中国畜牧兽医 》 2015 北大核心
摘要：试验旨在从新吉细毛羊皮肤组织表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)中筛选与毛囊发育相关基因并探讨其表达模式与羊毛细度的相关性。利用组装、比对软件Trinity与Blat对新吉细毛羊皮肤组织ESTs组装、注释进而筛选与毛囊发育相关基因,并通过实时荧光定量PCR相对定量方法以2-△△Ct值检测相关基因在不同绵羊个体中的表达规律。结果显示,从474条ESTs中筛选注释获得了4个与毛囊发育相关的角蛋白基因KRT27、KAP3.2、KAP11.1和KAP8.1;4个角蛋白基因在超细型细毛羊皮肤组织表达量极显著高于细型细毛羊的表达量(P<0.01);4个角蛋白基因表达量:KRT27>KAP3.2>KAP11.1>KAP8.1。该研究为角蛋白基因在细毛羊转录水平上的研究提供了一定数据。
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新疆部分地区发病猪场猪瘟病毒的诊断
《新疆畜牧业 》 2015
摘要：为了解当前新疆发病猪场猪瘟的流行情况,对新疆29个发病猪场采集的病料进行病原学诊断。结果表明,新疆猪瘟以非典型为主,典型猪瘟也同时存在。29个发病猪场中有7个猪场诊断为猪瘟阳性,发病猪场猪瘟的阳性检出率为24.14%。其中有2个猪场的样品中检出猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征混合感染,混合感染率为6.9%。建议对发病猪场采取综合性防控措施。
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绵羊卵丘细胞直径与卵母细胞质量的相关性
《江苏农业科学 》 2014 北大核心
摘要：利用RT-PCR方法,检测不同直径绵羊卵泡卵丘细胞中FSHR、EGFR、GHR、b FGF、CYP19A、AMH基因的mRNA表达规律及卵母细胞孤雌激活后胚胎发育的影响,结果表明,大、中、小卵泡卵丘细胞中都有FSHR、EGFR、GHR、b FGF、CYP19A、AMH的mRNA表达,不同直径卵泡卵丘细胞呈现递增趋势,大卵泡卵丘细胞与中小卵泡的卵丘细胞相对表达量差异显著(P<0.05);AMH在直径>5.0 mm的卵泡卵丘细胞中有所下降。不同大小卵泡卵母细胞经体外培养,结果表明,各卵泡卵母细胞直径组间成熟率不显著,随卵泡直径的增大卵裂率增加,1.0~2.0 mm组与2.1~5.0 mm组卵裂率都显著低于>5 mm组(P<0.05),相互间无差异(P>0.05);囊胚率也呈现逐渐增加的趋势,卵泡大于5.0 mm卵母细胞组极显著高于1.0~2.0 mm组(P<0.01),2.1~5.0 mm组(P<0.05)。证实卵丘细胞在绵羊卵母细胞成熟和受精及随后的胚胎发育过程中起重要作用,卵泡直径对卵母细胞发育能力产生影响。
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奶牛乳房炎无乳链球菌的分离鉴定与特异、快速检测方法
《新疆农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】了解新疆奶牛乳房炎病例中无乳链球菌的感染状况和生物学特性,建立特异、快速检测方法。【方法】采集新疆4个不同地区规模化奶牛场乳房炎奶样,分别用鉴别培养基和绵羊血琼脂平板进行无乳链球菌分离培养、形态学观察、生化试验、PCR鉴定、致病性和常用抗生素敏感性试验。【结果】从检测出的139份乳房炎阳性奶样中分离出无乳链球菌24株。所分离菌株培养特性与生化反应符合该菌特性;依据元乳链球菌16S rRNA基因序列设计引物扩增所得PCR产物在405 bp处出现特异性条带;分离菌株对青霉素、氯霉素、庆大霉素、红霉素、万古霉素、克林霉素、头孢西丁、环丙沙星均敏感,对四环素、强力霉素、复方新诺明耐药。【结论】Granada选择性培养基培养和PCR扩增均可用于乳房炎奶样中无乳链球菌的特异、快速鉴定;新疆乳房炎奶样中无乳链球菌感染率为17.27%。
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传统方法和PCR法在结核分枝杆菌复合群菌种鉴定中的对比研究
《中国防痨杂志 》 2013
摘要：目的对结核分枝杆菌复合群菌种鉴定的传统方法与PCR法进行对比研究,为临床应用提供科学依据。方法分别采用传统结核分枝杆菌菌种鉴定方法(对硝基苯甲酸和噻吩-2-羧酸肼)和PCR法,对2010年4月至2011年5月新疆喀什胸科医院住院、临床确诊肺结核患者的313份(例)晨痰标本临床分离株进行菌种鉴定。立意抽样法抽出100份结核分枝杆菌、牛分枝杆菌及非洲分枝杆菌Ⅰ型菌株,用Spoligotyping法检测前两种方法结果的可靠性。结果传统方法检测出结核分枝杆菌253株,牛分枝杆菌60株;而PCR法检测出结核分枝杆菌306株,牛分枝杆菌1株,非洲分枝杆菌Ⅰ型6株,两者间差异无统计学意义(χ2=5.05,P=0.08),两者检测的一致率为79.87%(250/313)。传统方法和PCR法鉴定结果差异虽无统计学意义,但传统方法检测出牛分枝杆菌60株,而PCR法仅检测出牛分枝杆菌1株,差异有统计学意义(χ2=4.16,P=0.04),故用立意抽检100份菌株,用Spoligotyping检测出牛分枝杆菌2株,结核分枝杆菌90株、非洲分枝杆菌Ⅰ型6株,2株未能检出菌型;其和传统方法与PCR法的一致率分别为38.78%[(2+36)/98]、98.98%[(1+90+6)/98]。结论经过Spoligotyping法检测可知,在结核分枝杆菌复合群菌种鉴定中传统方法较PCR法耗时、繁琐,且不能较准确地鉴定出菌种,而PCR法可准确、快速的将其鉴定到亚种。
关键词： 分枝杆菌,结核 分枝杆菌,牛 培养基 细菌学技术 聚合酶链反应 对比研究
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中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立
《新疆农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR Green I染料技术的Real-Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其熔解曲线分析。【结果】以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值(Ct)与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系,GAPDH基因标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=一3.679 51g/X+35.648,相关系数R=0.999 8;试验重复性好,批内和批间变异系数(CV%)分别为0.22%～3.45%和1.30%～4.89%。【结论】所建立的方法具有快速、线性范围广、重复性强等特点,GAPDH可作为内参基因用于绵羊相关基因的定量表达研究。
关键词： 中国美利奴羊(新疆型) GAPDH基因 RT-PCR 内参基因
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布鲁氏菌PCR鉴定方法的研究与应用
《中国人兽共患病学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：目的采用PCR、PCR-SSCP方法对布鲁氏菌进行快速鉴定,并对其种、型鉴别。方法分析已发表布鲁氏菌属、种、型基因序列,寻找出不同布鲁氏菌的种、型特异性碱基分布规律,设计特异性引物,用于布鲁氏菌属、种、型的鉴定;根据聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析原理,建立PCR-SSCP方法,用于区分牛种A19疫苗株与其他型布鲁氏菌。结果所建立的PCR方法能高效、准确鉴定出布鲁氏菌,并能对其种、型进行区分;PCR-SSCP方法可将A19疫苗株从其他型布鲁氏菌中区分出来。结论利用PCR、PCR-SSCP方法能快速、准确地进行布鲁氏菌属、种、型以及疫苗株A19的鉴别,且简便、可靠,便于临床应用。
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猪弓形虫特异PCR诊断方法的建立
《新疆农业科学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立特异PCR方法诊断猪弓形虫病。【方法】以核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列作为弓形虫种特异的遗传标记,优化PCR反应条件,对猪弓形虫分离株和临床病料进行检测。随机取阳性PCR扩增片段进行克隆,测序鉴定。【结果】在猪弓形虫分离株中PCR扩增出目的条带,且在肺门淋巴结和肠系膜淋巴结中扩增出特异性条带;PCR方法能检测到的最低DNA量为7.81 pg/μL;测序结果显示核苷酸序列与Genbank中已登录的猪弓形虫IST1基因序列相应部分序列完全相同。【结论】该PCR方法具有较高的敏感性和特异性,是诊断猪弓形虫病的一种快速检测方法。
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布鲁氏杆菌感染和免疫模型动物血清学与细菌学检测的比较研究
《草食家畜 》 2010
摘要：用布鲁氏杆菌强毒感染、弱毒疫苗免疫制备模型实验动物,采集不同时段各个试验组的血清、全血、脏器样品(心、肝、脾、肺、肾、睾丸或子宫、淋巴),进行虎红平板凝集试验、试管凝集试验、补体结合试验、细菌培养及PCR等检测。分析攻毒组和免疫组之间、免疫组之间的血清学与细菌学检测诊断的差异。结果表明:感染和免疫、免疫组相互间的不同血清学与细菌学检测均受到时段的限定。
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