科研产出
用半定量RT-PCR法检测BⅢB4基因在绵羊皮肤组织中的mRNA表达
《新疆农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,测定新吉细毛羊皮肤组织中BⅢB4基因mRNA表达水平,以18SrRNA为内标,分析相对表达量及其与羊毛细度的关系。通过探讨和优化PCR体系中退火温度、MgCl2浓度和循环次数等参数,建立了检测羊毛细度相关基因mRNA表达的半定量RT-PCR体系。用Independent Samples T Test分析BⅢB4 PCR产物与18SrRNA PCR产物电泳后的灰度比值,可知BⅢB4基因mRNA表达量对羊毛细度的影响。
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狂犬病病毒口服疫苗株SRV_9全长基因质粒的构建
《新疆农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：狂犬病病毒(Rabies Virus)是一种致死性的人畜共患病。为了深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,研究根据GenBank中已公布的狂犬病病毒口服疫苗株SRV9(登录号:AF499686)基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,通过RT-PCR技术将总RNA中SRV9全长基因组11,928 bp分5段扩增,分别克隆到pMD18-T或pGEM-T载体测序鉴定。测序正确后,再克隆至pBluescript skⅡ(+)载体,利用扩增片段自身内切酶切位点顺次进行全长连接,获得含SRV9全长基因组的质粒pBLSRV9。通过基因组序列同源性比较分析,SRV9株具有稳定的遗传特性,为进一步探索狂犬病病毒的复制、感染、致病及免疫分子机制和研制新型狂犬病病毒疫苗奠定良好的基础。
关键词： 狂犬病病毒SRV9 RT-PCR 基因序列分析 全长基因质粒构建
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禽流感病毒新疆株A/Duck/XJ/4(H5N1)的PB1、PB2和PA基因测序及进化分析
《山东农业大学学报(自然科学版) 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：通过RT-PCR技术对禽流感病毒新疆株A/Duck/X J/4(H5N1)的PB1、PB2和PA基因分别进行了扩增及克隆,测序结果表明该毒株的PB2、PB1和PA基因全长核苷酸序列分别为2341 bp、2282 bp和2187 bp。同源性分析表明A/Duck/X J/4(H5N1)株与禽源、野生鸟类和猪源的禽流感毒株均有很高的同源性(86.3%~99.6%)。与人源毒株相比,PB2和PA与A/HK/156/97(H5N1)株的同源性较低(86.3%~88.7%);与A/V ietnam/CL01/2004(H5N1)株和A/hum an/Zhejiang/16/2006(H5N1)株的同源性较高(93.0%~98.8%);PB1与人源毒株A/HK/156/97(H5N1)、A/V ietnam/CL01/2004(H5N1)、A/hum an/Zhejiang/16/2006(H5N1)同源性为91.1%~93.2%。
关键词： 禽流感病毒 PB1、PB2和PA基因 RT-PCR 序列分析
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禽流感病毒新疆株A/Duck/XJ/4的NP基因序列分析
《新疆农业大学学报 》 2008 北大核心
摘要：用RT-PCR法,以1株H5N1亚型禽流感病毒新疆分离株A/Duck/XJ/4为模板,扩增了NP全基因cD-NA,克隆至T载体,并进行序列测定。序列分析结果表明:扩增的NP基因全长1 518 bp,最大的开放阅读框在18~1 514 bp,编码499个氨基酸。将A/Duck/XJ/4毒株NP基因序列与15株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株间NP基因核苷酸序列同源性81.4%~99.0%,编码的氨基酸同源性在92.8%~99.6%。
应用PCR法和LAMP法鉴定牛早期胚胎性别的研究
《新疆农业大学学报 》 2006
摘要：通过设计特异性引物,优化Mg2+浓度、退火温度和循环时间等影响PCR的因素,确定了适合现场应用的PCR反应体系;46枚胚胎现场的鉴定率为87%,移植妊娠率为28%,准确率为85%,证明建立的PCR胚胎性别鉴定方法可用于生产。使用LAMP法对126枚常规胚胎和42枚性控胚胎现场鉴定,鉴定率95%,移植妊娠率33%,准确率88%,结果证明该方法可应用于牛早期胚胎性别鉴定。PCR法和LAMP法所鉴定同一样品的结果一致,说明在控制好实验条件的情况下,根据实际情况可选用这两种方法中的任何一种进行性别鉴定应用。
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β-酪蛋白基因在不同乳腺上皮细胞中表达的初步分析
《新疆农业大学学报 》 2006
摘要：应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对山羊乳腺上皮细胞(GMEC)中β-酪蛋白mRNA进行检测以评价GMEC乳蛋白合成的功能。同时,比较商品化小鼠乳腺癌细胞C127、人乳腺癌细胞系T47D中β-酪蛋白基因的转录表达。结果表明,原代培养山羊乳腺上皮细胞GMEC-1能够检测到β-酪蛋白基因的表达,在激素诱导下,GMEC-3细胞中能检测到β-酪蛋白基因mRNA,但C127和T47D细胞系中均无法检测到。
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连续多重PCR牛胚胎性别鉴定
《新疆农业大学学报 》 2004
摘要： 本实验以BOV97M序列和牛的1.715卫星DNA序列设计引物进行PCR扩增,其中前者为雄性特异扩增,后者为雌雄共同扩增,以进行牛的性别鉴定。PCR扩增共进行43个循环,其中前11个循环为雄性特异扩增,在随后的33个循环中,再加入内标引物,即进行多重PCR扩增,其灵敏度可达到10pg级(约3个细胞)。
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建立高效的转基因动物鉴定技术体系
《草食家畜 》 2001
摘要：转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PCR的特异性和可靠性。实验表明 ,PCR扩增及其产物酶切是一种准确、灵敏、简便、重现性好的转基因动物筛选鉴定方法
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应用聚合酶链反应检测山羊关节炎-脑炎前病毒
《新疆农业科学 》 1997
摘要：以CAE病毒同源的MVV1514毒株LTR核酸序列片段作引物，用PCR对不同来源的4株CAE毒株GSM细胞培养物进行扩增，均为阳性。采人工感染CAE病毒的山羊外周血淋巴细胞进行检测，攻毒7天后即出现阳性反应。
关键词： 聚合酶链反应 山羊关节炎－脑炎病毒
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